Железо-агар с тремя сахарами HiMedia ME021-500G (уп/500 гр)

Питательная микробиологическая среда Железо-агар с тремя сахарами HiMedia ME021-500G (уп/500 гр) предназначена для дифференциации грамотрицательных кишечных патогенов по ферментации глюкозы, лактозы и сахарозы и образованию H₂S. Среда применяется для идентификации энтеробактерий; результат оценивают по изменению цвета скоса и столбика, образованию газа и почернению среды.

Назначение

Трёхсахарный железный агар (TSI), также обозначаемый как агаровая среда M, используют для идентификации и дифференциации грамотрицательных кишечных патогенов на основании ферментации глюкозы, лактозы и сахарозы и образования сероводорода (H₂S). Методика рекомендована Европейской фармакопеей, 2008.

Состав

Состав среды скорректирован и стандартизирован для обеспечения заданных рабочих параметров.

Методика приготовления

1. Суспендируйте 64,03 г сухой обезвоженной среды, что соответствует массе среды на 1 л, в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Тщательно перемешайте и распределите среду по пробиркам.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин либо в соответствии с валидированным циклом стерилизации.
5. Дайте среде застыть в наклонном положении, сформировав столбик длиной около 25,4 мм (1″).

Принцип действия и интерпретация

Трёхсахарный железный агар применяется для идентификации и дифференциации представителей Enterobacteria в соответствии с Европейской фармакопеей, 2008. Среда первоначально предложена Sulkin и Willett и модифицирована Hajna для идентификации Enterobacteriaceae.

Пептоны — казеиновый и мясной, дрожжевой экстракт и мясной экстракт — обеспечивают среду азотистыми соединениями, серой, микроэлементами и витаминами группы B. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие.

Лактоза, сахароза и моногидрат глюкозы являются ферментируемыми углеводами. Тиосульфат натрия и ионы железа формируют индикаторную систему для выявления H₂S. Тиосульфат натрия также инактивирует галогены и может снижать их токсичность в исследуемой пробе при проведении испытаний на микробиологические пределы. Феноловый красный служит индикатором pH.

Микроорганизмы, ферментирующие моногидрат глюкозы, образуют различные кислоты, из-за чего цвет среды изменяется с красного на жёлтый. В столбике при ферментации выделяется больше кислот, чем в скошенной части, где преобладают процессы дыхания. Растущие бактерии также образуют щелочные продукты окислительного декарбоксилирования пептонов. Эти щелочные продукты нейтрализуют значительное количество кислоты, присутствующей в столбике.

Появление щелочной красной скошенной части и кислого жёлтого столбика после инкубации указывает, что микроорганизм ферментирует глюкозу, но не способен ферментировать лактозу и/или сахарозу.

Бактерии, ферментирующие лактозу или сахарозу либо оба углевода одновременно, дополнительно к глюкозе образуют большое количество кислоты. В этой области pH не возвращается к исходному значению, поэтому скошенная часть и столбик остаются кислыми.

Образование газа выявляют по наличию трещин или пузырьков в среде, возникающих при выходе накопившегося газа. Тиосульфат восстанавливается некоторыми видами бактерий до сероводорода. H₂S реагирует с ионами железа солей железа с образованием нерастворимого чёрного осадка сульфида железа. Восстановление тиосульфата происходит только в кислой среде, поэтому почернение обычно наблюдается в столбике пробирки.

TSI следует использовать параллельно с мочевинным агаром или бульоном — M112/M111 — для дифференциации видов Salmonella и Proteus.

Интерпретация реакций

• Щелочная скошенная часть / кислый столбик: ферментируется только глюкоза.
• Кислая скошенная часть / кислый столбик: ферментируются глюкоза и сахароза, либо глюкоза и лактоза, либо все три сахара — глюкоза, лактоза и сахароза.
• Пузырьки или трещины: образование газа.
• Чёрный осадок: образование газа H₂S.

Некоторые представители Enterobacteriaceae и продуцирующие H₂S штаммы Salmonella могут не давать положительной реакции на H₂S на агаре TSI. Некоторые бактерии способны образовывать H₂S на железном агаре Клиглера, но не на агаре TSI. Это может происходить потому, что утилизация сахарозы в агаре TSI подавляет ферментативный путь, приводящий к образованию H₂S.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или розовый однородный сыпучий порошок.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,2%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках в виде скошенного агара образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель розовато-красного цвета.

Реакция среды

После стерилизации для 6,4%-ного водного раствора:

• pH: 7,4 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 7,20–7,60.

Испытание ростовых свойств

Испытание проводят в соответствии с Европейской фармакопеей.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 30–35 °C в течение 24–48 ч.