HiMedia MCD972-100G Желчно-эскулиновый HiCynth агар

Питательная дифференциальная среда HiMedia MCD972-100G Желчно-эскулиновый HiCynth агар для выделения и предварительной идентификации стрептококков группы D. Среда предназначена для анализа пищевой и фармацевтической продукции и изготовлена на основе химически определённых пептонов без компонентов животного или растительного происхождения.

Назначение и область применения

Bile Esculin HiCynth агар — дифференциальная питательная среда для выделения и предварительной идентификации стрептококков группы D из пищевых продуктов и фармацевтической продукции.

Среда также позволяет дифференцировать Enterobacteriaceae, Klebsiella, Enterobacter и Serratia от других родов семейства Enterobacteriaceae по способности гидролизовать эскулин. Для идентификации Enterococci необходимо дополнительно проводить другие тесты, включая определение устойчивости к соли.

Состав

Состав на 1 л:

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия параметрам рабочих характеристик.

* Пептоны с химически определённым составом.

Принцип действия и интерпретация

Стрептококки группы D обладают антигеном липотейхоевой кислоты группы D в клеточной стенке. Виды, ранее относившиеся к группе D и являющиеся преимущественными нормальными обитателями желудочно-кишечного тракта человека, обозначают как фекальные стрептококки или Enterococci (1).

Уникальная способность Enterococci расщеплять эскулин была описана Meyer и Schonfeld (2). Enterococci и стрептококки группы D гидролизуют эскулин с образованием эскулетина и декстрозы. Эскулетин реагирует с цитратом железа с образованием коричневато-чёрного осадка (3). Применение гидролиза эскулина для идентификации Enterococci впервые было описано Rochaix (4).

Агар Bile Esculin первоначально разработан Swan (6) для выделения и идентификации стрептококков группы D из пищевых продуктов. Facklam и Moody (7, 8) дополнительно показали, что агар Bile Esculin позволяет дифференцировать стрептококки группы D от стрептококков, не относящихся к группе D.

Bile Esculin HiCynth агар изготовлен с полной заменой пептонов животного или растительного происхождения на химически определённые пептоны для исключения рисков, связанных с губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота (BSE) и трансмиссивными губчатыми энцефалопатиями (TSE).

Среда обладает высокой питательностью. Пептоны HiCynth No.1 и HiCynth No.5 служат источниками углерода, азота, аминокислот, витаминов и необходимых питательных веществ для роста микроорганизмов. Синтетическое моющее средство No. II подавляет большинство сопутствующих бактерий.

Эскулин в составе среды гидролизуется до эскулетина и декстрозы. Эскулетин реагирует с цитратом железа с образованием тёмно-коричневого или чёрного комплекса, который визуализируется как зона чёрного осадка вокруг колоний.

При разливе среды в пробирки с формированием скошенной поверхности положительная реакция определяется по почернению более половины скошенной поверхности в течение 24–48 ч. Если почернение полностью отсутствует или в течение 24–48 ч почернело менее половины скошенной поверхности, реакцию считают отрицательной.

Viridans Streptococci иногда дают слабую положительную реакцию. Виды Leuconostoc, Pediococcus и Lactococcus, вызывающие инфекции у человека, дают положительный результат в тесте на гидролиз эскулина в присутствии желчи.

Методика проведения анализа

1. Инокулируйте исследуемую пробу в бульон Todd Hewitt (M313).
2. Инкубируйте посев в течение 24 ч.
3. Внесите две капли культуры на поверхность скошенной или чашечной среды.
4. Инкубируйте посев в атмосфере с повышенным содержанием CO₂ при 35–37 °C в течение 18–24 ч.
5. Оцените рост, восстановление культуры и реакцию гидролиза эскулина.
6. При использовании пробирок со скошенной средой положительную реакцию регистрируют при почернении более половины скошенной поверхности в течение 24–48 ч. Отсутствие почернения или почернение менее половины скошенной поверхности означает отрицательную реакцию.
7. Чёрное окрашивание или чёрный осадок вокруг колоний указывает на положительную реакцию гидролиза эскулина.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 64,5 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте.
6. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.
7. В качестве альтернативы среду можно разлить в пробирки с формированием скошенной поверхности.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный, легко пересыпающийся порошок от светло-жёлтого до коричневато-жёлтого цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри или пробирках со скошенной поверхностью образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель янтарного цвета с голубоватым оттенком.
• Реакция: реакция 6,5%-ного водного раствора по массе при 25 °C.
• pH: 6,40–6,80.
• Конечный pH: 6,6 ± 0,2 при 25 °C.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч в атмосфере с повышенным содержанием CO₂.

Технические характеристики

• Наименование: желчно-эскулиновый HiCynth агар.
• Артикул: MCD972-100G.
• Производитель: HiMedia.
• Тип продукта: HiCynth™.
• Назначение изделия: агар, дифференциальная питательная среда.
• Происхождение пептонов: химически определённые пептоны HiCynth™.
• Физическая форма: порошок.
• Масса: 100 г.
• Тип упаковки: полиэтилен высокой плотности (HDPE).
• Рабочая концентрация при приготовлении: 64,5 г/л.
• Темпера