HiMedia MCD870-500G TCBS HiCynth агар (селективный)

Селективная питательная среда HiMedia MCD870-500G TCBS HiCynth агар (селективный) — химически определённый агар для микробиологического анализа. Среда предназначена для селективного выделения Vibrio cholerae и других энтеропатогенных вибрионов из пищевых продуктов и воды; масса упаковки составляет 500 г, температура хранения — 10–30 °C.

Назначение

Среда рекомендована для селективного выделения Vibrio cholerae и других энтеропатогенных вибрионов.

Тип образца:

• пищевые продукты;
• вода.

Состав

Состав на 1 л среды:

* Химически определённые пептоны.

** Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Принцип действия и интерпретация результатов

TCBS-агар разработан Kobayashi и соавторами на основе селективной среды Nakanishi. Первоначально среда предназначалась для выделения Vibrio cholerae и Vibrio parahaemolyticus, однако большинство вибрионов на ней формирует крупные полноценные колонии с различной морфологией.

Среда TCBS также рекомендована APHA для селективного выделения Vibrio cholerae и Vibrio parahaemolyticus. Для выделения Vibrio cholerae обычно применяют обогащение в щелочной пептонной воде или щелочной пептонной воде HiCynth™ M618/MCD618 с последующим высевом на TCBS-агар.

В TCBS HiCynth™ агар животные и растительные пептоны заменены химически определёнными пептонами для исключения рисков, связанных с BSE/TSE, характерных для пептонов животного происхождения.

Пептоны HiCynth™ № 3 и HiCynth™ № 5 обеспечивают среду азотистыми соединениями, витаминами группы B и другими необходимыми питательными веществами. Синтетическое моющее вещество и цитрат натрия подавляют грамположительные бактерии и колиформные микроорганизмы.

Тиосульфат натрия служит источником серы, которая в сочетании с цитратом железа позволяет выявлять образование сероводорода H₂S.

Для метаболизма вибрионов в состав внесена ферментируемая углеводная компонента — сахароза:

• вибрионы, способные утилизировать сахарозу, образуют жёлтые колонии;
• штаммы Vibrio cholerae формируют жёлтые колонии вследствие ферментации сахарозы;
• Vibrio alginolyticus также образует жёлтые колонии;
• Vibrio parahaemolyticus не ферментирует сахарозу и образует сине-зелёные колонии;
• Vibrio vulnificus также образует сине-зелёные колонии;
• виды Proteus, ферментирующие сахарозу, могут образовывать жёлтые колонии.

Бромтимоловый синий и тимоловый синий являются индикаторами pH. Щелочной pH среды улучшает выделение Vibrio cholerae.

В описании среды указано, что TCBS HiCynth™ агар пригоден для оксидазного тестирования видов Vibrio. В разделе ограничений применения приведено противоположное указание, согласно которому TCBS-агар не является подходящей средой для оксидазного тестирования видов Vibrio.

Некоторые штаммы Vibrio cholerae могут иметь зелёную или бесцветную окраску на TCBS HiCynth™ агаре вследствие замедленной ферментации сахарозы. Среда обладает высокой селективностью в отношении видов Vibrio, однако отдельные изоляты Pseudomonas и Aeromonas также могут формировать на TCBS-агаре сине-зелёные колонии.

Любая колония на TCBS-агаре, отрицательная по H₂S, может рассматриваться как предположительно положительная на Vibrio. Для окончательной идентификации необходимо выполнить дополнительные биохимические и серологические тесты.

Среду следует интенсивно инокулировать фекальными образцами, поскольку рост некоторых видов может подавляться из-за ферментации сахарозы и накопления кислот.

Методика приготовления среды

1. Приготовьте суспензию из 89,08 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Не стерилизуйте среду в автоклаве.
4. Охладите раствор до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте.
6. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Сбор и обращение с образцами

Для пищевых образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам.

Для образцов воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам и местным стандартам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Перед вскрытием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической работы при обращении с образцами и культурами.
• При обращении с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности, установленные соответствующими руководствами.
• Требования безопасности приведены в индивидуальных паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. Среду следует интенсивно инокулировать фекальными образцами, поскольку рост некоторых видов может подавляться из-за ферментации сахарозы и накопления кислот.
2. Отдельные изоляты Pseudomonas и Aeromonas также могут формировать на TCBS-агаре сине-зелёные колонии.
3. Виды Proteus, ферментирующие сахарозу, могут образовывать жёлтые колонии.
4. TCBS-агар не является подходящей средой для оксидазного тестирования видов Vibrio.
5. Некоторые штаммы Vibrio cholerae могут иметь зелёную или бесцветную окраску на TCBS-агаре вследствие замедленной ферментации сахарозы.
6. TCBS-агар обладает высокой селективностью в отношении видов Vibrio. Любая колония на TCBS-агаре, отрицательная по H₂S, может рассматриваться как предположительно положительная на Vibrio.
7. Для полной идентификации необходимо выполнить дополнительные биохимические и серологические тесты.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от светло-жёлтого до светло-коричневого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель сине-зелёного цвета.

Реакция среды

Реакция 8,9%-ного водного раствора при 25 °C.

• pH: 8,8 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 8,60–9,00.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.