HiMedia MCD868-500G Железо-сульфитный HiCynth агар

Железо-сульфитный HiCynth агар HiMedia MCD868-500G — селективная питательная среда на основе химически определенного пептона для выявления термофильных анаэробных организмов. Применяется для обнаружения бактерий, вызывающих сульфидную порчу пищевых продуктов; вес упаковки составляет 500 г.

Область применения

Среда рекомендуется для обнаружения термофильных анаэробных микроорганизмов, которые вызывают сульфидную порчу продуктов питания.

Принцип измерения и интерпретация

Железо-сульфитный агар является модификацией агара Кэмерона, разработанного Национальной ассоциацией консервщиков Америки. В данной модификации (HiCynth™) животные пептоны заменены химически определенным пептоном для исключения риска заражения прионными заболеваниями (BSE/TSE).

Большинство клостридий обладают сульфитредуктазой в цитоплазме, но не способны выводить её наружу. При восстановлении сульфита до H₂S в присутствии цитрата железа образуется осадок сульфида железа, что приводит к окрашиванию колоний в чёрный цвет.

Химически определенный пептон HiCynth™ №3 обеспечивает необходимые азот, углерод, длинноцепочечные аминокислоты, витамины и другие питательные вещества для роста бактерий. Сульфитредуцирующие бактерии обычно образуют чёрные колонии в результате восстановления сульфита до сульфида, который реагирует с солью железа (III).

Методика проведения анализа

Для обнаружения организмов, вызывающих сульфидную порчу, применяются два метода:

Метод глубокого посева (Deep-Shake Culture Method)

1. Разлить среду в пробирки по 10 мл.
2. Внести пробу, когда температура среды составит около 50 °C.
3. Дать среде застыть и инкубировать при 55 °C в течение 24–48 часов.
4. Результат: типичные термофильные виды, такие как Desulfotomaculum nigrificans, образуют отчетливые чёрные сферические колонии в толще среды.

Метод Аттенборо и Скарра (Attenborough and Scarr Method)

1. Разбавленные пробы сахара или других пищевых продуктов фильтруют через мембранные фильтры.
2. Фильтры сворачивают в рулон и помещают в пробирки, содержащие достаточное количество железо-сульфитного HiCynth агара (при температуре 50 °C), чтобы полностью покрыть их.
3. После застывания среды инкубируют при 55–56 °C в течение 24–48 часов.
4. Подсчитывают количество чёрных колоний на мембранном фильтре.
5. Проводят подтверждающие тесты для идентификации организма.

Важное примечание: Почернение является лишь предварительным доказательством роста клостридий. Для окончательной идентификации обязательны подтверждающие тесты. Многие грамотрицательные бактерии также способны восстанавливать сульфит с образованием сульфида железа, однако в этих случаях ферменты являются внеклеточными, и вся среда становится тёмной, что делает подсчёт колоний невозможным.

Технические характеристики

Состав (г/л)

Общие параметры

• Внешний вид: светло-жёлтый или коричневато-жёлтый гомогенный свободнотекучий порошок
• Цвет и прозрачность готовой среды: жёлтый, слегка опалесцирующий гель
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,5 % агаром
• Диапазон pH: 6,90–7,30
• Реакция 2,6 % (масса/объем) водного раствора при 25 °C: pH 7,1 ± 0,2

Дополнительные спецификации

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются в анаэробных условиях после инкубации при 55–56 °C в течение 24–48 часов.

Приготовление и стерилизация

1. Суспендировать 26 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$ 0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.
4. Охладить до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре ниже 30 °C.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание образования комков.
• Хранить в сухом вентилируемом помещении, защищенном от экстремальных температур и источников возгорания.