HiMedia MCD868-500G Железо-сульфитный HiCynth агар

Питательная агаризованная среда HiMedia MCD868-500G Железо-сульфитный HiCynth агар для выявления термофильных анаэробных микроорганизмов, вызывающих сульфидную порчу пищевых продуктов, с химически определённым пептоном HiCynth™. Среда применяется для микробиологического контроля пищевого сырья и продуктов; чёрное окрашивание колоний является предположительным признаком роста клостридий и требует подтверждающих тестов.

Назначение

Железо-сульфитный HiCynth агар MCD868 предназначен для выявления термофильных анаэробных микроорганизмов, вызывающих сульфидную порчу пищевых продуктов.

Состав

Состав на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия рабочим параметрам.
* Пептон с химически определённым составом.

Принцип действия и интерпретация результатов

Железо-сульфитный агар представляет собой модификацию сульфитного агара Камерона, разработанного Национальной ассоциацией консервной промышленности США. Было показано, что концентрация сульфита 0,1 % в исходной формуле подавляет рост некоторых штаммов Clostridium sporogenes. Позднее было подтверждено, что концентрация сульфита 0,05 % не подавляет рост исследуемых микроорганизмов.

Большинство клостридий содержит сульфитредуктазу в цитоплазме, но не способно выводить этот фермент наружу. При образовании H₂S из сульфита колония темнеет вследствие формирования осадка сульфида железа из цитрата железа.

Железо-сульфитный HiCynth™ агар является модификацией этой среды, в которой пептон животного происхождения заменён пептоном с химически определённым составом для исключения риска губчатой энцефалопатии крупного рогатого скота (BSE) и трансмиссивных губчатых энцефалопатий (TSE).

Пептон HiCynth™ № 3 обеспечивает среду источниками азота, углеродсодержащими соединениями, аминокислотами с длинной цепью, витаминами и другими питательными веществами, необходимыми для роста бактерий. Сульфитредуцирующие бактерии обычно образуют чёрные колонии в результате восстановления сульфита до сульфида; образовавшийся сульфид взаимодействует с солью железа (III).

Почернение среды может быть вызвано не только клостридиями. Многие грамотрицательные бактерии способны восстанавливать сульфит с образованием сульфида железа, однако в этих случаях ферменты являются внеклеточными, поэтому темнеет весь объём среды и количественный подсчёт микроорганизмов становится невозможным.

Методики выявления микроорганизмов

Глубинный посев с перемешиванием

1. Разлить среду в пробирки порциями по 10 мл.
2. Внести исследуемую пробу, когда температура среды составляет приблизительно 50 °C.
3. Дать среде застыть.
4. Инкубировать при 55 °C в течение 24–48 ч.
5. Оценить наличие характерных чёрных колоний в толще среды.

Типичный термофильный вид Desulfotomaculum nigrificans образует в толще среды отчётливые чёрные сферические колонии.

Метод Аттенборо и Скарра

1. Разбавленные пробы сахара или другого пищевого продукта профильтровать через мембранные фильтры.
2. Свернуть мембранные фильтры.
3. Поместить свёрнутые фильтры в пробирки, содержащие минимальный объём железо-сульфитного HiCynth™ агара при температуре 50 °C, достаточный для их покрытия.
4. Дать среде застыть.
5. Инкубировать при 55–56 °C в течение 24–48 ч.
6. После инкубации подсчитать количество чёрных колоний на мембранном фильтре.
7. Провести подтверждающие тесты для идентификации микроорганизмов, выросших в среде.

Мембранно-фильтрационная методика сокращает продолжительность анализа, сохраняет сопоставимую точность и позволяет исследовать больший объём пробы. Почернение является только предположительным свидетельством роста клостридий; для идентификации необходимо выполнить подтверждающие тесты.

Технические характеристики

• Назначение изделия: агаризованная питательная среда
• Производитель: HiMedia
• Модель/артикул: MCD868-500G
• Происхождение пептона: химически определённый состав, HiCynth™
• Тип продукта: HiCynth™
• Физическая форма: порошок
• Тип упаковки: HDPE (полиэтилен высокой плотности)
• Масса: 500 г
• Диапазон pH: 6,90–7,30
• Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 2,6 % масс./об. при 25 °C
• Конечный pH при 25 °C: 7,1 ± 0,2
• Температура хранения сухого продукта: ниже 30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C
• Температура инокуляции для глубинного посева: около 50 °C
• Температура инкубации при глубинном посеве: 55 °C
• Температура инкубации при мембранно-фильтрационной методике: 55–56 °C
• Продолжительность инкубации: 24–48 ч
• Условия инкубации: анаэробные

Приготовление среды

1. Суспендировать 26 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизовать в автоклаве при давлении 15 фунтов, ориентировочно ≈0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладить среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешать.
6. Разлить в стерильные чашки Петри.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или желтовато-коричневый однородный сыпучий порошок.

Желирование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется жёлтый слегка опалесцирующий гель.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют в анаэробных условиях после инкубации при 55–56 °C в течение 24–48 ч.

Хранение и срок годности

Хранить сухой продукт при температуре ниже 30 °C в плотно закрытой ёмкости.

После вскрытия флакон необходимо плотно закрывать и хранить в сухом виде для предотвращения комкования, обусловленного гигроскопичностью продукта. Неправильное хранение может привести к образованию комков.

Хранить в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения. После использования плотно закрывать ёмкость. Использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

Методическое ограничение

Чёрное окрашивание колоний или среды не является достаточным основанием для окончательной идентификации клостридий. При обнаружении почернения необходимо проводить подтверждающие тесты.