HiMedia MCD868-100G Железо-сульфитный HiCynth агар

Микробиологическая агаризованная питательная среда HiMedia MCD868-100G Железо-сульфитный HiCynth агар в форме порошка, содержащая 2,6 % компонентов в водном растворе и имеющая конечный pH 7,1 ± 0,2. Среда предназначена для выявления термофильных анаэробных микроорганизмов, вызывающих сульфидную порчу пищевых продуктов; почернение колоний является только предварительным признаком роста клостридий и требует подтверждающих тестов.

Назначение

Среда рекомендуется для выявления термофильных анаэробных микроорганизмов, вызывающих сульфидную порчу пищевых продуктов.

Состав

Расход компонентов на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных показателей эффективности. Пептон является химически определённым.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 26 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Железо-сульфитный агар представляет собой модификацию сульфитного агара Камерона, разработанного Национальной ассоциацией производителей консервов США. В исходной формуле концентрация сульфита 0,1 % подавляла рост некоторых штаммов Clostridium sporogenes; концентрация сульфита 0,05 % не подавляет рост исследуемых микроорганизмов.

Большинство клостридий имеют сульфитредуктазу в цитоплазме, но не способны выделять этот фермент наружу. При образовании H₂S из сульфита колония темнеет вследствие формирования осадка сульфида железа из цитрата железа.

Железо-сульфитный HiCynth™ агар использует химически определённый пептон вместо пептонов животного происхождения, что позволяет избежать риска губчатой энцефалопатии крупного рогатого скота и трансмиссивных губчатых энцефалопатий (BSE/TSE).

Пептон HiCynth™ № 3 обеспечивает микроорганизмы азотом, углеродсодержащими соединениями, аминокислотами с длинной цепью, витаминами и другими питательными веществами, необходимыми для роста бактерий. Сульфитредуцирующие бактерии обычно образуют чёрные колонии в результате восстановления сульфита до сульфида; сульфид реагирует с солью железа(III).

Методы выявления микроорганизмов, вызывающих сульфидную порчу

Метод глубинного посева в расплавленную среду

1. Разлейте среду по 10 мл в пробирки.
2. Внесите исследуемую пробу, когда температура среды составляет приблизительно 50 °C.
3. Дайте среде застыть.
4. Инкубируйте при 55 °C в течение 24–48 ч.

Типичный термофильный вид Desulfotomaculum nigrificans образует в толще среды отчётливые чёрные сферические колонии.

Метод Аттенборо и Скарра

1. Разбавленные пробы сахара или другого пищевого продукта профильтруйте через мембранные фильтры.
2. Сверните мембранные фильтры и поместите их в пробирки, содержащие минимальное количество железо-сульфитного HiCynth™ агара при температуре 50 °C, достаточное для покрытия фильтров.
3. Дайте среде застыть.
4. Инкубируйте при 55–56 °C в течение 24–48 ч.
5. После инкубации подсчитайте количество чёрных колоний на мембранном фильтре.
6. Проведите подтверждающие тесты для идентификации микроорганизмов, выросших в среде.

Мембранно-фильтрационный метод позволяет сократить время анализа, сохраняет сопоставимую точность и обеспечивает исследование проб большего объёма. Реакция почернения является только предварительным свидетельством роста клостридий; для идентификации необходимо выполнить подтверждающие тесты.

Некоторые грамотрицательные бактерии также способны восстанавливать сульфит с образованием сульфида железа. В этих случаях ферменты являются внеклеточными, поэтому темнеет весь объём среды и подсчёт колоний становится невозможным.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный, легко пересыпаемый порошок от светло-жёлтого до желтовато-коричневого цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Характеристики приготовленной среды

В чашках Петри образуется жёлтый, слегка опалесцирующий гель.

Реакция и pH

• Реакция: водный раствор с концентрацией 2,6 % масс./об. при 25 °C.
• pH: 7,1 ± 0,2.
• Диапазон pH: 6,90–7,30.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют в анаэробных условиях после инкубации при 55–56 °C в течение 24–48 ч.

Технические характеристики

• Назначение изделия: агар.
• Масса: 100 г.
• Температурный диапазон: 10–30 °C.

Хранение и срок годности

• Храните порошок при температуре ниже 30 °C в плотно закрытой ёмкости.
• Храните приготовленную среду при 2–8 °C.
• После вскрытия плотно закройте флакон и храните продукт в сухом состоянии.
• Из-за гигроскопичности продукта необходимо предотвращать образование комков.
• Неправильное хранение может привести к комкованию порошка.
• Храните продукт в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников возгорания.
• После каждого использования плотно закрывайте ёмкость.
• Используйте продукт до истечения срока годности, указанного на этикетке.