HiMedia MCD493-500G HiCynth агар с желчью, эскулином и азидом

Питательная агаризованная среда HiMedia MCD493-500G HiCynth агар с желчью, эскулином и азидом содержит химически определённые пептоны HiCynth™. Среда предназначена для выделения и предварительной идентификации фекальных стрептококков, при этом для подтверждения энтерококков необходимо выполнять дополнительные биохимические тесты.

Назначение

HiCynth агар с желчью, эскулином и азидом рекомендован для выделения и предварительной идентификации фекальных стрептококков, включая энтерококки.

Типы образцов:

• пищевые продукты;
• вода.

Среда также применяется для:

• дифференциации стрептококков группы D и стрептококков, не относящихся к группе D;
• дифференциации энтеробактерий, включая Klebsiella, Enterobacter и Serratia, от других родов семейства Enterobacteriaceae по способности гидролизовать эскулин;
• прямого выделения энтерококков без мембранной фильтрации;
• подтверждения энтерококков в пробах воды после предварительного выращивания колоний на среде Сланеца—Бартли.

Состав

Состав рассчитан на 1 л среды:

* Пептоны с химически определённым составом.

** Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заявленных характеристик среды.

Происхождение основы: химически определённая среда HiCynth™.

Принцип действия и интерпретация

Стрептококки группы D имеют в клеточной стенке антиген липотейхоевой кислоты группы D. Виды бывшей группы D, являющиеся преобладающими представителями нормальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта человека, называют фекальными стрептококками или энтерококками.

Уникальная способность энтерококков расщеплять эскулин используется для их выявления. Энтерококки и стрептококки группы D гидролизуют эскулин с образованием эскулетина и декстрозы. Эскулетин реагирует с цитратом железа с образованием коричнево-чёрного осадка.

Агар с желчью и эскулином был первоначально разработан Swan для выделения и идентификации стрептококков группы D из пищевых продуктов. Впоследствии было показано, что эта среда позволяет дифференцировать стрептококки группы D и стрептококки, не относящиеся к группе D. Гидролиз эскулина также используется для дифференциации представителей родов Enterobacteriaceae, Klebsiella, Enterobacter и Serratia от других родов семейства Enterobacteriaceae.

Агар с желчью, эскулином и азидом представляет собой модификацию агара с желчью и эскулином:

• пептоны животного или растительного происхождения заменены пептонами с химически определённым составом для исключения рисков BSE/TSE, связанных с пептонами животного происхождения;
• снижена концентрация желчи;
• добавлен азид натрия.

Пептоны HiCynth™ № 3 и HiCynth™ № 5 служат источниками углерода, азота, аминокислот, витаминов и других необходимых питательных веществ. Желчь и азид натрия подавляют рост большинства сопутствующих бактерий.

Эскулин гидролизуется до эскулетина и декстрозы. Эскулетин реагирует с цитратом железа с образованием тёмно-коричневого или чёрного комплекса, визуализируемого как зона чёрного осадка вокруг колоний.

При разливе среды в пробирки в виде скошенного агара:

• положительная реакция — почернение более половины скошенной поверхности в течение 24–48 ч;
• отрицательная реакция — полное отсутствие почернения либо почернение менее половины скошенной поверхности в течение 24–48 ч.

Стрептококки группы viridans иногда дают слабоположительную реакцию. Положительную реакцию на желчь и эскулин также могут давать виды Leuconostoc, Pediococcus и Lactococcus, вызывающие инфекции у человека. Для усиления роста энтерококков среду можно дополнить лошадиной сывороткой в количестве 50 мл/л.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 56,65 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/дюйм² (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте.
6. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Методика анализа проб воды

1. Отфильтруйте предполагаемые пробы воды через мембранные фильтры.
2. Асептически поместите мембранные фильтры на среду Сланеца—Бартли (M612I).
3. После инкубации отберите красные или бордовые колонии для дальнейшего подтверждения.
4. Асептически перенесите мембранный фильтр на чашку с агаром с желчью, эскулином и азидом, предварительно нагретую до 44 °C.
5. После инокуляции инкубируйте при температуре 44 ± 0,5 °C в течение 2 ч.
6. Подсчитайте все типичные колонии, вокруг которых наблюдается коричнево-чёрное окрашивание среды; такие колонии учитывают как кишечные энтерококки.

Для прямого выделения энтерококков без применения мембранного фильтра инкубируйте посевы при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Технические характеристики

• Тип продукта: HiCynth™.
• Назначение изделия: агар.
• Физическая форма: порошок.
• Масса: 500 г.
• Тип упаковки: ПЭВП (полиэтилен высокой плотности).
• Температура хранения сухой среды: 10–30 °C.
• Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C.
• Конечный pH: 7,1 ± 0,2.
• Диапазон pH: 6,90–7,30.
• Концентрация водного раствора для контроля реакции: 5,67 % масс./об. при 25 °C.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный, сыпучий порошок кремового или жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель янтарного цвета с голубоватым оттенком.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики наблюдают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.