HiMedia MCD467-100G HiCynth агар Хектоена энтерик

Питательная среда HiMedia MCD467-100G HiCynth агар Хектоена энтерик — сухая химически определённая селективно-дифференциальная агаровая среда для выделения энтеробактерий. Применяется для дифференциального и селективного выделения видов Shigella и Salmonella из пищевых и молочных образцов; инкубация проводится при 35–37 °C в течение 18–24 ч без автоклавирования приготовленной среды.

Назначение

HiMedia MCD467-100G HiCynth агар Хектоена энтерик рекомендуется для дифференциального и селективного выделения видов Shigella и Salmonella из различных образцов, прежде всего из пищевых продуктов и молочных образцов.

Состав

Состав на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности.

* Пептоны с химически определённым составом.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 76,67 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Не автоклавируйте.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация результатов

Среды, обеспечивающие выделение более широкого спектра кишечных патогенов, обычно обладают меньшей ингибирующей активностью в отношении представителей непатогенной кишечной микрофлоры. Агар Хектоена энтерик был разработан в 1967 году Кингом и Мецгером из Института Хектоена для повышения частоты выделения микроорганизмов родов Shigella и Salmonella по сравнению с другими средами, широко применявшимися в лабораториях того времени.

Агар Хектоена энтерик HiCynth™ представляет собой модификацию этой среды с использованием пептонов с химически определённым составом, не содержащих пептоны животного и растительного происхождения. Это позволяет избежать рисков, связанных с BSE/TSE, характерных для пептонов животного происхождения. Дезоксихолат натрия заменён солями желчных кислот в сниженной концентрации, что обеспечивает рост Shigella и Salmonella. Для компенсации ингибирующего действия солей желчных кислот увеличена концентрация пептонов HiCynth™.

Пищевые продукты, содержащие мясо птицы, яйца или молочные компоненты, являются наиболее частыми источниками пищевого сальмонеллёза. Агар Хектоена энтерик используется в составе многоэтапных процедур выделения Salmonella из таких образцов.

Повышенные концентрации углеводов, пептона HiCynth™ № 2 и пептона HiCynth™ № 6 снижают ингибирующее действие солей желчных кислот и индикаторов и обеспечивают хороший рост видов Salmonella и Shigella при подавлении нормальной кишечной микрофлоры.

Среда содержит три углевода — лактозу, сахарозу и салицин — для дифференциации кишечных патогенов:

• повышенная концентрация лактозы облегчает визуализацию кишечных патогенов и уменьшает вероятность ошибочной интерпретации при замедленной ферментации лактозы;
• салицин ферментируется многими колиформными бактериями, включая микроорганизмы, не ферментирующие лактозу и сахарозу;
• сочетание цитрата аммония и железа с тиосульфатом натрия позволяет выявлять образование сероводорода H₂S; результатом является формирование колоний с чёрным центром;
• индикаторная система на основе кислотного фуксина и бромтимолового синего обладает меньшей токсичностью по сравнению с другими средами для энтеробактерий, что способствует восстановлению энтеропатогенных микроорганизмов.

Для усиления селективности среды Hoben и соавторы добавляли новобиоцин в концентрации 15 мг/л. Новобиоцин ингибирует виды Citrobacter и Proteus. Taylor и Schelhaut отмечали пригодность среды для дифференциации патогенных кишечных микроорганизмов и улучшения роста Shigella.

Методика посева и инкубации

1. Инокулируйте среду свежими фекалиями, суспендированными в растворе Рингера, либо непосредственно ректальными тампонами.
2. Распределите посевной материал по поверхности среды для получения изолированных колоний.
3. Инкубируйте посевы при 35–37 °C в течение 18–24 ч.
4. При необходимости продолжите инкубацию: дополнительное время инкубации улучшает дифференциацию Salmonella и Shigella.
5. Для подтверждения принадлежности микроорганизмов выполните дополнительные исследования, поскольку виды Proteus могут иметь сходный внешний вид с Salmonella или Shigella.

После инкубации на большинстве чашек наблюдается участок сливного роста. Метод штрихового посева фактически представляет собой метод последовательного «разведения»: на последующие участки поверхности среды наносится уменьшающееся количество микроорганизмов. Поэтому один или несколько участков должны содержать изолированные колонии микроорганизмов, присутствующих в образце. Ингибирующее действие среды способствует лучшему выделению отдельных колоний.

Тип образца

• Пищевые продукты.
• Молочные образцы.

Отбор и обращение с образцами

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Перед открыванием контейнера прочитайте этикетку.
• Используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической работы при обращении с образцами и культурами.
• При работе с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности, установленные действующими руководствами.
• При необходимости обращайтесь к индивидуальным паспортам безопасности.

Ограничения метода

1. Дополнительная инкубация улучшает дифференциацию Salmonella и Shigella. Виды Proteus могут быть похожи на Salmonella или Shigella, поэтому для подтверждения необходимы дополнительные исследования.
2. Поскольку среда является селективной, её следует применять совместно с другими питательными средами.
3. Для полной идентификации необходимы дополнительные биохимические и серологические исследования.

Контроль качества

Эффективность среды ожидается при использовании в соответствии с инструкцией на этикетке, в течение срока годности и при хранении в рекомендованных условиях.

Внешний вид

Кремовый или жёлтый порошок с бежеватым оттенком; однородный, свободно сыпучий.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется зелёный прозрачный или слегка опалесцирующий гель.

Реакция

Реакция 7,67%-ного водного раствора по массе к объёму при 25 °C.

pH

pH: 7,30–7,70.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °