Сухая химически определённая основа декарбоксилазного HiCynth™ бульона Мёллера HiMedia MCD393-100G предназначена для приготовления питательной среды с добавлением соответствующей L-аминокислоты. Основа используется для дифференциации бактерий по способности декарбоксилировать аминокислоты; масса упаковки составляет 100 г, температура хранения — 10–30 °C.

Назначение

Основа декарбоксилазного бульона HiCynth™ Мёллера применяется для дифференциации бактерий по способности декарбоксилировать аминокислоты после добавления соответствующей L-аминокислоты.

Состав

Состав готовой среды:

** Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия рабочим параметрам.

* Пептон с химически определённым составом.

Методика приготовления среды

1. Взвесьте 10,52 г основы и суспендируйте в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Добавьте 10 г L-лизина, L-аргинина, L-орнитина или другой L-аминокислоты.
3. При использовании DL-аминокислот применяйте концентрацию 2 %.
4. При необходимости нагрейте среду для полного растворения.
5. При добавлении L-орнитина повторно отрегулируйте pH.
6. Разлейте среду по 5 мл в пробирки с завинчивающимися крышками.
7. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (≈0,10 МПа) и температуре 121 °C в течение 10 мин.

Принцип измерения и интерпретация

Декарбоксилазный бульон HiCynth™ Мёллера используется для дифференциации грамотрицательных кишечных палочек по способности декарбоксилировать аминокислоты. Метод декарбоксилазного бульона был введён Мёллером для выявления образования лизиндекарбоксилазы, орнитиндекарбоксилазы и аргининдигидролазы.

До работ Мёллера бактериальные декарбоксилазы аминокислот изучались Gale и Gale с Epps. Образование орнитиндекарбоксилазы является полезным критерием при дифференциации видов Klebsiella и Enterobacter. Бактерии рода Klebsiella неподвижны и не образуют орнитиндекарбоксилазу, тогда как бактерии рода Enterobacter подвижны и образуют орнитиндекарбоксилазу, за исключением Enterobacter agglomerans.

В основе используется пептон HiCynth™ № 1, обеспечивающий азотистые и углеродистые соединения, аминокислоты с длинной цепью и другие необходимые питательные вещества для роста бактерий. Декстроза является сбраживаемым углеводом, а пиридоксаль — коферментом фермента декарбоксилазы. Бромкрезоловый пурпурный и крезоловый красный выполняют функцию индикаторов pH.

При внесении бактерий, сбраживающих декстрозу, pH среды снижается вследствие образования кислоты, из-за чего цвет индикатора изменяется с пурпурного на жёлтый. Образовавшаяся кислота стимулирует фермент декарбоксилазу. При декарбоксилировании лизина образуется кадаверин, а при декарбоксилировании орнитина — путресцин. Аргинин сначала гидролизуется до орнитина, который затем декарбоксилируется с образованием путресцина.

Образование аминов повышает pH среды и изменяет цвет индикатора с жёлтого на пурпурный. Если микроорганизмы не образуют соответствующий фермент, среда остаётся кислой и приобретает жёлтый цвет.

Каждый исследуемый изолят также необходимо инокулировать в пробирку со средой «Декарбоксилазный бульон Мёллера», не содержащей аминокислоту. Инокулированные пробирки необходимо защищать от контакта с воздухом слоем стерильного минерального масла. Воздействие воздуха может вызвать ощелачивание поверхности среды и сделать результат теста недействительным.

Тип образцов

• Пищевые образцы.
• Молочные образцы.
• Образцы воды.

Отбор и обращение с образцами

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов согласно установленным руководствам.

Для образцов воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов согласно установленным руководствам и местным стандартам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

1. Некоторые требовательные к условиям культивирования микроорганизмы могут давать замедленную реакцию.
2. Покрытие среды слоем минерального масла необходимо для получения корректных результатов.
3. Отдельные микроорганизмы различаются по требованиям к росту и могут демонстрировать различные варианты роста на среде.

Предупреждения и меры предосторожности

• Перед открыванием контейнера ознакомьтесь с маркировкой.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте надлежащие правила работы в микробиологической лаборатории при обращении с образцами и культурами.
• При работе с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности согласно установленным руководствам.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или зеленовато-жёлтый однородный сыпучий порошок.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Прозрачный раствор пурпурного цвета без осадка в пробирках.

Реакция

Реакция водного раствора с концентрацией 1,05 % масс./об. при 25 °C.

pH: 6,0 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 5,80–6,20.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение до 4 суток с добавлением соответствующих аминокислот и покрытием стерильным минеральным маслом.

* Соответствующие номера WDCM.

Ранее использовавшееся название Enterobacter aerogenes.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения основы в плотно закрытом контейнере: 10–30 °C.
• Температура хранения приготовленной среды: 15–30 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия продукт необходимо хранить в сухом виде, плотно закрыв флакон, чтобы предотвратить образование комков вследствие гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Хранить в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экст