L.mono дифференциальный HiCynth™ агар-основа HiMedia MCD1540-500G (500 г)

Сухая питательная среда L.mono дифференциальный HiCynth™ агар-основа HiMedia MCD1540-500G (500 г) — селективная и дифференциальная основа на химически определённых пептонах. Среда предназначена для выделения Listeria monocytogenes из пищевых продуктов и кормов; дифференциация основана на активности фосфатидилинозитол-специфической фосфолипазы C (PIPLC).

Назначение

Среда предназначена для селективного и дифференциального выделения Listeria monocytogenes.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизована для соответствия рабочим характеристикам. Пептоны HiCynth™ № 1 и № 5 имеют химически определённый состав.

Принцип действия

Среда основана на рецептуре Ottaviani и Agosti для селективного и дифференциального выделения Listeria monocytogenes из пищевых продуктов и кормов; эта рецептура принята комитетом ISO.

Традиционные среды, включая PALCAM и Oxford, не позволяют дифференцировать L. monocytogenes и L. innocua, поскольку эти виды обладают сходными биохимическими свойствами. Патогенность Listeria ivanovii для человека не установлена. Listeria monocytogenes — грамположительный пищевой патоген, вызывающий тяжёлые инфекции: у беременных женщин инфекция может привести к выкидышу, мертворождению или рождению ребёнка с неонатальным листериозом; у взрослых и детей возможны менингит или первичная бактериемия.

Пептоны HiCynth™ № 1 и № 5 обеспечивают среду азотистыми и углеродсодержащими веществами, длинноцепочечными аминокислотами, витаминами и необходимыми для роста питательными веществами. Пируват натрия поддерживает рост микроорганизмов, глюкоза служит ферментируемым углеводом, хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие, а фосфат выполняет функцию буфера.

Хлорид лития и селективные добавки FD212 и FD213 подавляют сопутствующую микрофлору и обеспечивают рост видов Listeria. Виды Listeria гидролизуют хромогенный субстрат, в результате чего образуются колонии зелёного цвета. Для дифференциации Listeria monocytogenes от других видов Listeria используют активность фосфатидилинозитол-специфической фосфолипазы C (PIPLC). Фермент гидролизует очищенный субстрат из добавки FD214, образуя вокруг колоний Listeria monocytogenes непрозрачный ореол.

В среде химически определённые пептоны полностью заменяют пептоны животного или растительного происхождения, что позволяет избежать рисков, связанных с губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота (BSE) и трансмиссивными губчатыми энцефалопатиями (TSE).

Приготовление среды

1. Суспендируйте 36,02 г среды в 460 мл дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения, чтобы среда полностью растворилась.
3. Стерилизуйте в автоклаве при 121 °C в течение 15 мин под давлением около 0,10 МПа (15 фунтов на квадратный дюйм).
4. Охладите до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте стерильное содержимое одного флакона добавки для обогащения L. mono I (FD214) и стерильное восстановленное содержимое селективных добавок для L. mono I (FD212) и II (FD213).
6. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Предупреждение по безопасности

Хлорид лития вреден. Избегайте контакта с кожей и вдыхания паров. При попадании на кожу немедленно промойте большим количеством воды.

Контроль качества

• Внешний вид сухой среды: однородный сыпучий порошок кремового или жёлтого цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется гель светло-янтарного цвета с опалесценцией.
• Реакция 7,2%-ного водного раствора при 25 °C: pH 7,2 ± 0,2.
• Диапазон pH: 7,00–7,40.

Культуральные характеристики

Характеристики определяли после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч с добавлением стерильных селективных добавок для L. mono I (FD212), II (FD213) и добавки для обогащения L. mono I (FD214).

| Микроорганизм | Посевная доза (КОЕ) | Рост | Восстановление | Цвет колонии | Активность PIPLC