HiMedia MCD144-100G Основа колумбийского кровяного HiCynth агара

Питательная среда HiMedia MCD144-100G Основа колумбийского кровяного HiCynth агара — порошкообразная основа с химически определённым пептоном HiCynth™. Применяется для приготовления кровяного и шоколадного агара, селективных и идентификационных сред; среда не содержит V-фактор и поэтому не поддерживает рост Haemophilus influenzae.

Назначение

Основа колумбийского кровяного HiCynth агара используется для приготовления:

• кровяного агара;
• шоколадного агара;
• различных селективных сред;
• идентификационных сред;
• сред с добавлением сыворотки для тестирования вирулентности Corynebacterium diphtheriae.

Тип образца: пищевые продукты.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности. HiCynth™ Peptone No.3 — химически определённый пептон.

* Химически определённый пептон.

Методика приготовления

1. Суспендируйте 44,0 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/кв. дюйм, что соответствует приблизительно 0,10 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите основу до 45–50 °C перед добавлением термочувствительных компонентов.

Приготовление кровяного агара

Добавьте 5 % об./об. стерильной дефибринированной крови овцы к стерильной охлаждённой основе.

Приготовление шоколадного агара

Добавьте 10 % об./об. стерильной дефибринированной крови овцы к стерильной охлаждённой основе. Нагревайте до 80 °C в течение 10 мин при постоянном перемешивании.

Селективную среду можно получить добавлением различных противомикробных препаратов к стерильной основе.

Селективная среда для Brucella

Добавьте регидратированное содержимое одного флакона селективной добавки NPBCVN (FD005) к 500 мл стерильной расплавленной основы.

Селективная среда для Campylobacter

К 500 мл стерильной расплавленной основы добавьте:

• регидратированное содержимое одного флакона одной из селективных добавок:
  • Blaser-Wang (FD006);
  • Butzler (FD007);
  • Skirrow (FD008);
  • VTCA (FD090);
  • Butzler VI (FD106);
• регидратированное содержимое одного флакона минеральной ростовой добавки (FD009);
• 5–7 % об./об. крови лошади или овцы.

Селективная среда для Gardnerella

Добавьте регидратированное содержимое одного флакона селективной добавки GNA (FD056) к 500 мл стерильной расплавленной основы.

Среда для кокков

Добавьте регидратированное содержимое одного флакона одной из селективных добавок:

• NC (FD030);
• NNP (FD031);
• CO (FD119);

к 500 мл стерильной расплавленной основы.

Принцип действия и интерпретация

Основа колумбийского кровяного агара с 1 % агара представляет собой универсальную питательную агаровую основу, сформулированную Ellner и соавторами в 1966 году и дополнительно обогащаемую стерильной кровью. Традиционные основы кровяного агара содержали либо гидролизат казеина для быстрого формирования крупных колоний, либо мясной экстракт для получения определённых гемолитических реакций. В этой среде объединены оба подхода.

Основа колумбийского кровяного HiCynth™ агара с 1 % агара является модификацией такой среды: животные и растительные пептоны заменены химически определёнными пептонами, что исключает риски BSE/TSE, связанные с использованием животных пептонов.

Добавленный пептон HiCynth™ No.3 обеспечивает быстрый и обильный рост требовательных и нетребовательных микроорганизмов. Среда способствует формированию типичной морфологии колоний, улучшает образование пигмента и обеспечивает более чёткие гемолитические реакции.

Кукурузный крахмал служит источником энергии и нейтрализует токсичные метаболиты. Кровь овцы обеспечивает выявление гемолиза и поставляет гем — X-фактор, необходимый для роста многих бактерий. При этом кровь овцы не содержит V-фактор, которым является никотинамидадениндинуклеотид; поэтому Haemophilus influenzae, нуждающийся одновременно в X- и V-факторах, на этой среде не растёт.

Из-за относительно высокого содержания углеводов β-гемолитические стрептококки могут давать зеленоватую гемолитическую реакцию, которую можно ошибочно принять за α-гемолиз. Для всех колоний необходимо проводить подтверждающие тесты.

Колумбийская кровяная HiCynth™-основа используется для приготовления сред с кровью, а также селективных сред, в которых применяются различные комбинации противомикробных препаратов. Основа HiCynth™-агара с 1 % агара с добавлением стерильной сыворотки обеспечивает эффективную среду для тестирования вирулентности Corynebacterium diphtheriae.

После выполнения установленной методики для C. diphtheriae линии преципитации токсин–антитоксин отчётливо видны через 48 ч.

Многие патогены требуют углекислого газа; поэтому чашки можно инкубировать в атмосфере, содержащей приблизительно 3–10 % CO₂.

Условия культивирования

• Культуры Brucella высокоинфекционны и требуют осторожного обращения; инкубируйте их в атмосфере с 5–10 % CO₂.
• Виды Campylobacter лучше всего растут при 42 °C в микроаэрофильной атмосфере.
• Чашки с добавками для Gardnerella следует инкубировать при 35 °C в течение 48 ч в атмосфере с 7 % CO₂.

Обращение с образцами

Для пищевых образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно действующим руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Перед открытием контейнера ознакомьтесь с маркировкой.
• Используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При работе с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• При обращении с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Указания по безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения

1. Некоторые требовательные микроорганизмы, например Haemophilus influenzae, могут не расти на этой среде; может потребоваться добавление крови.
2. Из-за относительно высокого содержания углеводов β-гемолитические стрептококки могут давать зеленоватую гемолитическую реакцию, которую можно ошибочно принять за α-гемолиз.
3. Для всех колоний необходимо проводить подтверждающие тесты.
4. Из-за различий в пищевых потребностях у отдельных видов может наблюдаться вариабельный характер роста.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный свободносыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с гелем из 1,5 % агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Базальная среда: прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.
• После добавления 5 % масс./об. стерильной дефибринированной крови: в чашках Петри образуется непрозрачный гель вишнёво-красного цвета.

Реакция

Реакция водного раствора с концентрацией 4,4 % масс./об. при 25 °C: pH 7,3 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 7,10–7,50.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления 5 % масс./об. стерильной дефибринированной крови и инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.