HiMedia MCD1145-500G Основа HiCynth среды Листерия Оксфорд

Питательная среда HiMedia MCD1145-500G Основа HiCynth среды Листерия Оксфорд — сухая химически определённая основа для выделения видов Listeria. Основа применяется при анализе пищевых и молочных образцов, а рабочая температура хранения составляет 10–30 °C.

Назначение

Основа HiCynth среды «Листерия Оксфорд» рекомендована для выделения видов Listeria из различных образцов, в первую очередь из пищевых и молочных продуктов.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

* Пептон с химически определённым составом.

Принцип действия и интерпретация

Listeria monocytogenes — единственный вид рода Listeria, имеющий значение как возбудитель заболеваний человека. Listeria seeligeri, Listeria welshimeri и Listeria ivanovii связаны с заболеваниями животных. Все виды Listeria являются патогенными для овец и крупного рогатого скота.

Достоверная диагностика листериоза возможна только при выделении и культивировании возбудителя из образцов крови или спинномозговой жидкости поражённых организмов.

Основа среды «Листерия Оксфорд» изготовлена по рецептуре, описанной Curtis и соавторами, для выделения L. monocytogenes из клинических и пищевых образцов. В основе HiCynth среды «Листерия Оксфорд» животные и растительные пептоны заменены пептонами с химически определённым составом, что позволяет избежать рисков, связанных с BSE/TSE и использованием животных пептонов.

Пептон HiCynth™ № 1 служит источником углерода, азота, витаминов и других необходимых питательных веществ для микроорганизмов. Кукурузный крахмал нейтрализует образующиеся токсичные метаболиты. Хлорид лития и антибиотики подавляют грамотрицательные бактерии и большинство грамположительных микроорганизмов; отдельные штаммы стафилококков могут расти в виде колоний, отрицательных по гидролизу эскулина.

Селективная добавка Oxford FD071 снижает грибковую и бактериальную контаминацию, а хлорид лития подавляет бактерии, не относящиеся к видам Listeria. В качестве альтернативы можно использовать селективную добавку CM FD126, подавляющую как грамположительные, так и грамотрицательные бактерии.

L. monocytogenes гидролизует эскулин с образованием эскулетина и декстрозы. Эскулетин реагирует с ионами железа, в результате чего вокруг колоний образуются чёрные зоны.

Селективность среды достаточна для выделения и дифференциации микроорганизмов при прямом поверхностном посеве, однако рекомендуется предварительно разбавлять посевной материал; разбавление особенно необходимо для сильно загрязнённых образцов. Методика выделения зависит от исследуемого материала. Для всех типов образцов рекомендуется селективное и холодовое обогащение.

Методика приготовления среды

1. Приготовьте суспензию из 27,75 г порошка в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения, чтобы полностью растворить среду.
3. Стерилизуйте среду в автоклаве при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки Oxford FD071 или одного флакона селективной добавки CM FD126.
6. Тщательно перемешайте среду.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Методика выделения Listeria

Фекальные и биологические образцы

1. Гомогенизируйте образец в 0,1%-ной пептонной воде M028.
2. Отберите 0,1 мл полученной суспензии.
3. Выполните прямой посев на селективную среду для Listeria либо внесите образец в бульон для селективного обогащения.
4. Инкубируйте посевы при 30 °C в течение 7 суток.
5. При использовании бульона для селективного обогащения повторно высейте культуру на селективную среду для Listeria.

Пищевые и образцы окружающей среды

Для пищевых и образцов окружающей среды обычно применяют селективное обогащение.

Молоко и молочные продукты

1. Добавьте 25 мл или 25 г образца к 225 мл бульона для обогащения Listeria UVM M890A.
2. Тщательно гомогенизируйте и перемешайте смесь.
3. Инкубируйте смесь при 30 °C в течение 48 ч.
4. Выполните штриховой посев обогащённой культуры на среду «Листерия Оксфорд».
5. Инкубируйте посевы в аэробных условиях при 37 °C в течение 48 ч.
6. Отберите 5 типичных колоний, положительных по гидролизу эскулина.
7. Перенесите отобранные колонии на триптон-соевый агар HiCynth™ MCD290.
8. Инкубируйте посевы в течение 24 ч.
9. Используйте полученные колонии для биохимического подтверждения идентификации.

Тип образцов

• Пищевые образцы.
• Молочные образцы.

Сбор и обращение с образцами

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы сбора и подготовки проб согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать в автоклаве перед утилизацией.

Технические характеристики

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от светло-жёлтого до тёмно-жёлтого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,0%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель тёмно-янтарного цвета с голубоватым оттенком.

Реакция среды

Реакция 5,55%-ного водного раствора при 25 °C:

• pH: 7,0 ± 0,2.

Диапазон pH: 6,80–7,20.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления селективной добавки Oxford FD071 или CM FD126 и инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.
** Ранее обозначался как Bacillus subtilis subsp. spizizenii.

Условия хранения и срок годности

• Хранение сухого продукта: при температуре 10–30 °C в плотно закрытой ёмкости.
• Хранение приготовленной среды: при температуре 2–8 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом виде, чтобы предотвратить образование комков вследствие гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Место хранения: сухое, проветриваемое, защищённое от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После каждого использования контейнер необходимо плотно закрывать.
• Рабочие характеристики среды сохраняются при использовании в течение указанного срока годности и хранении при рекомендованной температуре.

Меры предосторожности

Перед вскрытием контейнера прочитайте этикетку.

При работе с образцами и культурами используйте:

• защитные перчатки;
• защитную одежду;
• средства защиты глаз;
• средства защиты лица.

Соб