HiMedia MCD1145-100G Основа HiCynth среды Листерия Оксфорд

Питательная среда HiMedia MCD1145-100G Основа HiCynth среды Листерия Оксфорд — химически определённая порошкообразная основа селективной среды для выделения Listeria. Предназначена для анализа пищевых и молочных образцов; хранится при 10–30 °C в плотно закрытой упаковке.

Назначение

Основа HiCynth среды Листерия Оксфорд рекомендуется для выделения видов Listeria из различных образцов, включая пищевые и молочные продукты.

Продукт представляет собой химически определённую питательную основу HiCynth™. Животные и растительные пептоны заменены химически определёнными пептонами для исключения рисков, связанных с BSE/TSE, возникающих при использовании пептонов животного происхождения.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности.

* Пептон с химически определённым составом.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 27,75 г порошка в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм, что соответствует приблизительно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки Oxford Selective Supplement (FD071) или одного флакона селективной добавки CM Selective Supplement (FD126).
6. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Listeria monocytogenes — единственный вид рода Listeria, имеющий значение как возбудитель заболеваний человека. Listeria seeligeri, Listeria welshimeri и Listeria ivanovii связаны с заболеваниями животных. Все виды могут быть патогенны для овец и крупного рогатого скота.

Положительная диагностика листериоза возможна только после выделения и культивирования возбудителя из образцов крови или спинномозговой жидкости поражённых организмов.

Основа среды Listeria Oxford основана на составе, описанном Curtis и соавторами для выделения L. monocytogenes из клинических и пищевых образцов.

Пептон HiCynth™ № 1 служит источником углерода, азота, витаминов и других необходимых питательных веществ для микроорганизмов. Кукурузный крахмал нейтрализует образующиеся токсичные метаболиты. Хлорид лития и антибиотики подавляют грамотрицательные бактерии и большинство грамположительных микроорганизмов; при этом некоторые штаммы стафилококков могут расти в виде колоний, отрицательных по гидролизу эскулина.

Селективная добавка Oxford Selective Supplement (FD071) снижает грибковую и бактериальную контаминацию, а хлорид лития подавляет бактерии, не относящиеся к видам Listeria. В качестве альтернативы можно использовать селективную добавку CM Selective Supplement (FD126), подавляющую как грамположительные, так и грамотрицательные бактерии.

L. monocytogenes гидролизует эскулин с образованием эскулетина и декстрозы. Эскулетин взаимодействует с ионами железа, в результате чего вокруг колоний образуются чёрные зоны.

Селективность среды достаточна для выделения и дифференциации микроорганизмов при прямом поверхностном посеве, однако рекомендуется предварительно разбавлять посевной материал; для сильно загрязнённых образцов разбавление особенно важно. Методика выделения зависит от исследуемого материала. Для всех типов образцов рекомендуется селективное и холодовое обогащение.

Методика анализа образцов

Фекальные и биологические образцы

1. Гомогенизируйте образец в 0,1%-ной пептонной воде (M028).
2. Нанесите 0,1 мл полученной суспензии непосредственно на селективную среду для Listeria или внесите образец в селективный обогащающий бульон.
3. Инкубируйте посевы при 30 °C в течение 7 суток.
4. После инкубации выполните пересев на селективную среду для Listeria.

Пищевые и образцы окружающей среды

Для пищевых образцов обычно используют селективное обогащение.

При выделении Listeria из пищевых продуктов, включая молоко и молочные продукты:

1. Внесите 25 мл или 25 г образца в 225 мл обогащающего бульона для Listeria UVM (M890A).
2. Тщательно гомогенизируйте и перемешайте.
3. Инкубируйте при 30 °C в течение 48 ч.
4. Пересеките обогащённую культуру на среду Listeria Oxford.
5. Инкубируйте аэробно при 37 °C в течение 48 ч.
6. Отберите 5 типичных колоний, положительных по гидролизу эскулина.
7. Пересевайте отобранные колонии на триптон-соевый агар HiCynth™ (MCD290).
8. Инкубируйте в течение 24 ч.
9. Используйте полученные колонии для биохимического подтверждения.

Тип образца

• Пищевые образцы.
• Молочные образцы.

Сбор и обращение с образцами

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб в соответствии с установленными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать в автоклаве перед утилизацией.

Меры предосторожности

• Перед открыванием контейнера прочитайте маркировку.
• Используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При работе с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• При обращении с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с утверждёнными руководствами.
• Информацию по безопасности можно получить в соответствующих паспортах безопасности.
• Работайте с культурой и образцами с учётом их потенциальной инфекционной опасности.

Ограничения применения

1. Разные микроорганизмы имеют индивидуальные требования к условиям роста и могут демонстрировать различные варианты роста на среде.
2. Каждая партия среды испытана на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа (COA). Для любого конкретного микроорганизма, не указанного в сертификате анализа, пользователь должен самостоятельно подтвердить пригодность среды с учётом поставленной задачи.
3. Для окончательной идентификации выделенных микроорганизмов необходимы дополнительные биохимические исследования.

Эффективность и оценка

Ожидаемые характеристики среды обеспечиваются при применении в соответствии с указаниями на этикетке, в пределах установленного срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный, свободно сыпучий порошок от светло-жёлтого до тёмно-жёлтого цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,0%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель тёмно-янтарного цвета с голубоватым оттенком.
• Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 5,55 % масс./об. при 25 °C; pH 7,0 ± 0,2.
• pH: 6,80–7,20.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления селективной добавки Oxford Selective Supplement (FD071) или CM Selective Supplement (FD126) и инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.