HiMedia MCD043-500G Основа HiCynth агара Бэрд-Паркера

Питательная среда HiMedia MCD043-500G Основа HiCynth агара Бэрд-Паркера производства HiMedia — химически определённая порошкообразная основа для приготовления селективной среды. Основа применяется для выделения и количественного определения коагулазоположительных стафилококков в пищевых и молочных образцах, при этом наличие Staphylococcus aureus требует подтверждения коагулазной реакцией.

Назначение

Основа HiCynth агара Бэрд-Паркера предназначена для выделения и количественного определения коагулазоположительных стафилококков из пищевых продуктов и других материалов.

Тип образцов: пищевые продукты и молочные образцы.

Состав

Состав, г/л:

* Пептоны с химически определённым составом.
Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Назначение изделия: основа питательной среды
• Торговая форма: HiCynth™
• Физическая форма: порошок
• Тип упаковки: HDPE (полиэтилен высокой плотности)
• Масса: 500 г
• Температура хранения порошка: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C
• Конечный pH: 7,0 ± 0,2
• Диапазон pH: 6,80–7,20

Приготовление среды

1. Суспендируйте 63,0 г порошка в 950 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм, ориентировочно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте один из вариантов добавок:
   • 50 мл концентрированной эмульсии яичного желтка (FD045) и 3 мл селективной добавки PTe 3,5 % (FD047);
   • 50 мл эмульсии яичного желтка Tel (FD046).
6. При необходимости дополнительного повышения селективности добавьте восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки BP S (FD069).
7. В качестве альтернативы один флакон ингибитора FPT (FD195) можно использовать на 90 мл среды вместо ингибитора FPT (FD046) для идентификации коагулазоположительных стафилококков.
8. Тщательно перемешайте среду и разлейте в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация результатов

Агар Бэрд-Паркера был разработан на основе теллурит-глициновой рецептуры для выделения и количественного определения стафилококков в пищевых продуктах и других материалах. Среда обеспечивает дифференциацию коагулазоположительных штаммов.

Между коагулазной реакцией и образованием прозрачной зоны липолиза на этой среде отмечается высокая корреляция. Прозрачная зона формируется вследствие действия лецитиназы стафилококков, расщепляющей яичный желток.

Почти 100 % коагулазоположительных стафилококков способны восстанавливать теллурит, что приводит к образованию чёрных колоний. Другие стафилококки не всегда обладают такой способностью. Среда менее ингибирующая для Staphylococcus aureus, чем другие среды аналогичного назначения, и одновременно обладает большей селективностью.

Идентификацию выделенного на агаре Бэрд-Паркера Staphylococcus aureus необходимо подтверждать коагулазной реакцией. Для выявления коагулазной активности в среду также можно добавлять фибриногеновую плазму.

Для альтернативной среды с ингибитором FPT растворите ингибитор FPT (FD195) в 10 мл стерильной дистиллированной воды и добавьте к 90 мл стерильной расплавленной среды, выдерживаемой при 45–50 °C. На такой среде коагулазоположительные колонии через 24–48 ч инкубации при 35 °C имеют окраску от белой до серо-чёрной и окружены непрозрачной зоной, обусловленной коагулазной активностью. Восстановление теллурита необходимо из-за отсутствия эмульсии яичного желтка. В результате образуются полупрозрачный агар и белые или серые колонии стафилококков.

Для получения количественных результатов выбирайте чашки с 20–200 колониями. Подсчитайте колонии, характерные для Staphylococcus aureus, и исследуйте их на коагулазную реакцию. Результат указывайте как количество Staphylococcus aureus на грамм пищевого продукта.

Добавление 50 мг/л сульфаметазина подавляет рост и роение бактерий рода Proteus.

Пептоны HiCynth™ № 2 и HiCynth™ № 7 являются источниками азота, углерода, серы и витаминов. Пируват натрия защищает повреждённые клетки, способствует их восстановлению и стимулирует рост Staphylococcus aureus без снижения селективности среды. Хлорид лития и теллурит калия подавляют большинство сопутствующих микроорганизмов, за исключением Staphylococcus aureus. Теллуритная добавка токсична для штаммов, не относящихся к S. aureus, которые образуют зоны просветления яичного желтка, и придаёт колониям чёрную окраску.

Глицин и пируват усиливают рост стафилококков. После добавления яичного желтка среда становится жёлтой и непрозрачной. Эмульсия яичного желтка не только обогащает среду, но и облегчает идентификацию микроорганизмов за счёт выявления лецитиназной активности — реакции с яичным желтком.

Прозрачная зона и серо-чёрные колонии являются диагностическими признаками коагулазоположительных стафилококков. При дальнейшем инкубировании вокруг колоний формируется непрозрачная зона, которая может быть обусловлена липолитической активностью.

Методика посева и инкубации

1. Инокулируйте исследуемый материал в объёме 0,1 мл на чашку Петри диаметром 90–100 мм.
2. Инкубируйте при 37 °C.
3. Проведите первое считывание через 24–26 ч.
4. Колонии Staphylococcus aureus имеют чёрную блестящую окраску, тонкий белый край и окружены прозрачной зоной.
5. Продолжите инкубацию при 37 °C ещё 24 ч.
6. После дополнительной инкубации выполните коагулазный тест для колоний, имеющих указанные характеристики и сформировавшихся в течение дополнительного периода инкубации.
7. Используйте чашки в день приготовления или в течение 48 ч после приготовления, чтобы избежать потери чёткости осадочных зон.

Базальная среда без эмульсии яичного желтка и теллурита отличается высокой стабильностью. Некоторые контаминирующие микроорганизмы могут разрушать ореол коагулазной реакции. На среде могут расти другие бактерии; биохимические тесты позволяют отличить коагулазоположительные стафилококки от остальных микроорганизмов.

Контроль качества

Внешний вид: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 2,0%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды:

• базальная среда — жёлтый прозрачный или слегка опалесцирующий гель;
• после добавления эмульсии яичного желтка и теллуритной эмульсии — жёлтый непрозрачный гель в чашках Петри.

Реакция: реакция водного раствора с массово-объёмной концентрацией 6,3 % при 25 °C.

pH: 6,80–7,20.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивали после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч. Степень восстановления принята равной 100 % для роста бактерий на агаре с переваром соево-казеиновой среды.