HiMedia MCD043-100G Основа HiCynth агара Бэрд-Паркера

Сухая питательная среда HiMedia MCD043-100G Основа HiCynth агара Бэрд-Паркера производства HiMedia с химически определённым составом. Основа применяется для выделения и количественного определения коагулазоположительных стафилококков в пищевых и молочных образцах; масса упаковки — 100 г.

Назначение и область применения

Основа HiCynth агара Бэрд-Паркера предназначена для выделения и количественного определения коагулазоположительных стафилококков из пищевых продуктов и других материалов.

Тип образцов: пищевые продукты и молочные образцы.

Состав

Состав приведён для приготовления 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных показателей эффективности.

* Пептоны с химически определённым составом.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 63,0 г порошка в 950 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте один из вариантов добавок:
   • 50 мл концентрированной эмульсии яичного желтка FD045 и 3 мл селективной добавки PTe 3,5 % FD047;
   • 50 мл эмульсии яичного желтка с теллуритом FD046.
6. Для дополнительного повышения селективности при необходимости добавьте восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки BP S FD069.
7. В качестве альтернативы один флакон ингибитора FPT FD195 может использоваться из расчёта на 90 мл среды вместо FPT Inhibitor FD046 для идентификации коагулазоположительных стафилококков.
8. Тщательно перемешайте среду и разлейте в стерильные чашки Петри.

Принцип измерения и интерпретация результатов

Агар Бэрд—Паркера разработан Baird Parker на основе формулы с теллуритом и глицином Zebovitz и применяется для выделения и количественного определения стафилококков в пищевых продуктах и других материалах, поскольку обеспечивает дифференциацию коагулазоположительных штаммов.

Между коагулазной реакцией и появлением прозрачной зоны липолиза в этой среде выявлена высокая корреляция. Прозрачная зона обусловлена действием лецитиназы стафилококков, расщепляющей яичный желток. Почти 100 % коагулазоположительных стафилококков способны восстанавливать теллурит, вследствие чего образуются чёрные колонии; другие стафилококки не всегда обладают такой способностью.

Среда менее ингибирующая для Staphylococcus aureus, чем другие среды, и одновременно обладает более высокой селективностью. Агар Бэрд—Паркера был официально принят Международной ассоциацией AOAC и рекомендован Фармакопеей США (USP) для проведения испытаний на микробиологические пределы. Комитет ISO также рекомендовал эту среду для выделения и количественного определения стафилококков.

Идентификация выделенного на агаре Бэрд—Паркера Staphylococcus aureus должна подтверждаться коагулазной реакцией. Среда также может использоваться для выявления коагулазной активности при добавлении фибриногеновой плазмы.

Для проведения реакции с ингибитором FPT FD195 растворите содержимое одного флакона в 10 мл стерильной дистиллированной воды и добавьте к 90 мл стерильной расплавленной среды, выдерживаемой при 45–50 °C. На этой среде коагулазоположительные колонии через 24–48 ч инкубации при 35 °C имеют окраску от белой до серо-чёрной и окружены непрозрачной зоной, обусловленной коагулазной активностью. В связи с отсутствием эмульсии яичного желтка восстановление теллурита является необходимым условием. В результате образуются полупрозрачный агар и белые или серые колонии стафилококков.

Для получения количественных результатов отбирайте чашки с 20–200 колониями. Подсчитайте колонии, характерные для Staphylococcus aureus, и исследуйте их на коагулазную реакцию. Результат указывайте как количество Staphylococcus aureus на грамм пищевого продукта.

Добавление сульфаметазина в концентрации 50 мг/л подавляет рост и роение видов Proteus.

Пептоны HiCynth™ № 2 и HiCynth™ № 7 являются источниками азота, углерода, серы и витаминов. Пируват натрия защищает повреждённые клетки, способствует их восстановлению и стимулирует рост Staphylococcus aureus, не снижая селективность среды. Хлорид лития и теллурит калия ингибируют большинство сопутствующей микрофлоры, за исключением Staphylococcus aureus. Теллуритная добавка токсична для отличных от S. aureus штаммов, расщепляющих яичный желток, и окрашивает колонии в чёрный цвет.

Глицин и пируват усиливают рост стафилококков. После добавления яичного желтка среда становится жёлтой и непрозрачной. Эмульсия яичного желтка не только обогащает среду, но и помогает идентифицировать микроорганизмы по лецитиназной активности — реакции с яичным желтком. Прозрачная зона и серо-чёрные колонии являются диагностическими признаками коагулазоположительных стафилококков. При дальнейшем инкубировании вокруг колоний формируется непрозрачная зона, которая может быть обусловлена липолитической активностью.

Методика проведения анализа

1. Инокулируйте исследуемый материал в объёме 0,1 мл на чашку Петри диаметром 90–100 мм.
2. Инкубируйте при 37 °C.
3. Проведите первое считывание через 24–26 ч. Колонии Staphylococcus aureus имеют чёрную блестящую окраску, тонкий белый край и окружены прозрачной зоной.
4. Продолжите инкубацию при 37 °C ещё 24 ч.
5. Выполните коагулазный тест для колоний с указанными характеристиками, сформировавшихся в течение дополнительного периода инкубации.
6. Для количественного анализа отберите чашки с 20–200 колониями, подсчитайте колонии, характерные для Staphylococcus aureus, и подтвердите их коагулазной реакцией.
7. Результат выражайте как количество Staphylococcus aureus на грамм пищевого продукта.

Чашки следует использовать в день приготовления или не позднее чем через 48 ч после приготовления, чтобы избежать потери чёткости преципитированных зон.

Базальная среда без эмульсии яичного желтка и теллурита обладает стабильностью. Колонии некоторых загрязняющих микроорганизмов могут разрушать ореол коагулазной реакции. На среде могут расти другие бактерии; биохимические тесты позволяют отличить коагулазоположительные стафилококки от остальных микроорганизмов.

Контроль качества

Внешний вид: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с гелем 2,0 % агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды:

• базальная среда — прозрачный или слегка опалесцирующий гель жёлтого цвета