HiMedia MCD024-500G Основа HiCynth агара с цетримидом

Питательная среда HiMedia MCD024-500G Основа HiCynth агара с цетримидом — порошкообразная химически определённая селективная основа с конечным pH 7,2 ± 0,2. Предназначена для селективного выделения Pseudomonas aeruginosa из проб воды, при этом высокая токсичность цетримидина может подавлять рост отдельных штаммов.

Назначение

Основа HiCynth агара с цетримидом предназначена для селективного выделения Pseudomonas aeruginosa, в том числе из проб воды. Среда также применяется при исследовании косметической продукции и образцов на наличие P. aeruginosa, а также для оценки эффективности дезинфицирующих средств в отношении этого микроорганизма.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Артикул: MCD024-500G
• Назначение изделия: основа питательной среды
• Тип среды: HiCynth™
• Происхождение пептона: химически определённое
• Физическая форма: порошок
• Тип упаковки: HDPE
• Масса: 500 г
• Температура хранения: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C
• Конечный pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,00–7,40

Состав

Количество компонентов приведено в граммах на литр.

* Пептон с химически определённым составом.
Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных характеристик эффективности.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 46,7 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 10 мл глицерина.
2. Нагрейте смесь до кипения, чтобы полностью растворить среду.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. При необходимости асептически добавьте регидратированное содержимое одного флакона селективной добавки NA Selective Supplement (FD130) к 1000 мл среды.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация результатов

Pseudomonas aeruginosa хорошо растёт на обычных лабораторных средах, однако для специфического выделения микроорганизма из объектов окружающей среды, а также из образцов человеческого, животного или растительного происхождения используют среду, содержащую селективный агент и компоненты, усиливающие образование пигмента.

Селективность среды основана на использовании цетримидина. Цетримидин подавляет рост многих микроорганизмов, одновременно позволяя Pseudomonas aeruginosa формировать типичные колонии. Цетримидин является четвертичной аммониевой солью и действует как катионное поверхностно-активное вещество: снижает поверхностное натяжение в месте контакта, оказывает осаждающее, комплексообразующее и денатурирующее действие на белки бактериальной мембраны. Цетримидин подавляет широкий спектр микроорганизмов, включая виды Pseudomonas, отличные от Pseudomonas aeruginosa.

Среда A, предназначенная для усиления образования пиоцианина бактериями рода Pseudomonas, была разработана King и соавторами. Цетримидиновый агар, разработанный Lowburry, представляет собой модификацию технического агара, или среды A, с добавлением 0,1 % цетримидина для селективного выделения P. aeruginosa. После появления высокоочищенного цетримидина его концентрация в среде была снижена.

Инкубацию проводят при 37 °C в течение 18–24 ч.

Основа Cetrimide HiCynth™ Agar Base представляет собой модификацию среды, в которой пептоны животного и растительного происхождения заменены пептонами на химически определённой основе для исключения рисков, связанных с губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота (BSE) и трансмиссивной губчатой энцефалопатией (TSE). Пептон HiCynth™ № 3 обеспечивает P. aeruginosa необходимыми питательными веществами. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие среды. Хлорид магния и сульфат калия стимулируют образование пиоцианина.

P. aeruginosa идентифицируют по характерному образованию пиоцианина, сине-зелёного водорастворимого нефлуоресцирующего феназинового пигмента, в сочетании с морфологией колоний и характерным виноградоподобным запахом аминоацетофенона. P. aeruginosa является единственным известным видом рода Pseudomonas, выделяющим пиоцианин, поэтому цетримидиновые среды имеют значение для идентификации этого микроорганизма.

Для выделения P. aeruginosa чашки с цетримидиновым агаром следует инокулировать материалом из неселективной среды, например из бульона BHI HiCynth™ (MCD210) или соево-триптиказного бульона HiCynth™ (MCD011). При высокой концентрации микроорганизмов исследуемую пробу можно непосредственно инокулировать на цетримидиновый агар.

Колонии P. aeruginosa могут быть пигментированными — синими или сине-зелёными — либо непигментированными. Колонии, демонстрирующие флуоресценцию при 250 нм и сине-зелёную пигментацию, рассматриваются как предположительно положительные. При кратковременном нахождении культур при комнатной температуре P. aeruginosa может утрачивать флуоресценцию под ультрафиолетовым излучением. После повторной инкубации чашек флуоресценция появляется снова.

На образование пигмента также может влиять тип пептона, использованного в основе среды. Некоторые штаммы P. aeruginosa не образуют пиоцианин. Другие виды Pseudomonas пиоцианин не образуют, но флуоресцируют под ультрафиолетовым излучением. Большинство непсевдомонадных видов подавляется на цетримидиновом агаре; некоторые виды Pseudomonas также могут подавляться.

Некоторые неферментирующие микроорганизмы и аэробные спорообразующие бактерии могут образовывать на этой среде водорастворимую пигментацию от желтовато-коричневой до коричневой. Serratia может образовывать розовую пигментацию. Для подтверждения результатов следует провести биохимические и серологические исследования.

Тип образца

• Пробы воды.

Отбор и обращение с образцами

Для проб воды необходимо применять соответствующие методы отбора образцов и выполнять обработку в соответствии с действующими руковод