HiMedia MCD024-100G Основа HiCynth агара с цетримидом

Основа питательной среды HiMedia MCD024-100G Основа HiCynth агара с цетримидом производства HiMedia — химически определённая порошкообразная среда с цетримидом для селективного выделения Pseudomonas aeruginosa. Среда применяется при анализе проб воды, косметических средств и образцов, а также для оценки эффективности дезинфицирующих средств; температура хранения продукта составляет 10–30 °C.

Назначение

Основа предназначена для приготовления цетримидного агара с целью селективного выделения Pseudomonas aeruginosa.

Тип образца

• Пробы воды.
• Также среда используется для исследования косметических средств и других образцов на наличие Pseudomonas aeruginosa, а также для оценки эффективности дезинфицирующих средств в отношении этого микроорганизма.

Состав

Количество компонентов указано в г/л.

* Пептон с химически определённым составом.
** Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных показателей эффективности.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 46,7 г основы в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 10 мл глицерина.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. При необходимости асептически добавьте к 1000 мл среды регидратированное содержимое 1 флакона селективной добавки NA Selective Supplement FD130.
6. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Pseudomonas aeruginosa хорошо растёт на обычных лабораторных питательных средах, однако для специфического выделения микроорганизма из объектов окружающей среды, а также из образцов человеческого, животного или растительного происхождения применяют среду, содержащую селективный агент и компоненты, усиливающие образование пигмента.

Селективность среды основана на природной устойчивости целевого вида к антибактериальным агентам. Цетримид подавляет рост многих микроорганизмов, одновременно позволяя Pseudomonas aeruginosa формировать типичные колонии. Цетримид представляет собой четвертичную аммониевую соль, действующую как катионное поверхностно-активное вещество: он снижает поверхностное натяжение в месте контакта и оказывает осаждающее, комплексообразующее и денатурирующее действие на белки бактериальной мембраны. Цетримид ингибирует широкий спектр микроорганизмов, включая виды Pseudomonas, отличные от Pseudomonas aeruginosa.

Кинг и соавторы разработали среду A для усиления образования пиоцианина бактериями рода Pseudomonas. Цетримидный агар, разработанный Лоубери, представляет собой модификацию технического агара — среды A — с добавлением 0,1 % цетримидина для селективного выделения P. aeruginosa. После появления высокоочищенного цетримидина его концентрацию в среде уменьшили. Инкубацию проводят при 37 °C в течение 18–24 ч.

Цетримидная основа агара HiCynth™ является модификацией, в которой пептоны животного и растительного происхождения заменены пептонами на химически определённой основе для исключения рисков, связанных с губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота и трансмиссивными губчатыми энцефалопатиями (BSE/TSE). P. aeruginosa может быть идентифицирована по характерному образованию пиоцианина — синего, водорастворимого нефлуоресцирующего феназинового пигмента — в сочетании с морфологией колоний и характерным виноградоподобным запахом аминоацетофенона. P. aeruginosa является единственным известным видом рода Pseudomonas, выделяющим пиоцианин, поэтому такие среды имеют значение для идентификации P. aeruginosa.

Пептон HiCynth™ № 3 обеспечивает P. aeruginosa необходимыми питательными веществами. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие среды. Хлорид магния и сульфат калия стимулируют образование пиоцианина.

Для выделения P. aeruginosa чашки с цетримидным агаром следует инокулировать из неселективной среды, например из бульона BHI HiCynth™ MCD210 или соево-казеинового триптонного бульона HiCynth™ MCD011. При высокой концентрации микроорганизмов исследуемый образец можно непосредственно инокулировать на цетримидный агар.

Колонии P. aeruginosa могут быть пигментированными — синими или сине-зелёными — либо непигментированными. Колонии, демонстрирующие флуоресценцию при 250 нм и сине-зелёную пигментацию, считают предположительно положительными. При кратковременном нахождении культур при комнатной температуре P. aeruginosa может утрачивать флуоресценцию в ультрафиолетовом свете. Флуоресценция появляется вновь после повторной инкубации чашек.

На образование пигмента также может влиять тип пептона, использованного в основе среды. Некоторые штаммы P. aeruginosa не образуют пиоцианин. Другие виды Pseudomonas не образуют пиоцианин, но флуоресцируют под ультрафиолетовым светом. Большинство видов, не относящихся к Pseudomonas, подавляются на цетримидном агаре; некоторые виды Pseudomonas также могут подавляться. Некоторые неферментирующие микроорганизмы и аэробные спорообразующие бактерии могут формировать на этой среде водорастворимую окраску от желтовато-коричневой до коричневой. Serratia может образовывать розовую пигментацию.

Для подтверждения результатов необходимо выполнить биохимические тесты и серологические исследования.

Отличие состава

В отличие от сред на основе пептонов животного и растительного происхождения, основа HiCynth™ содержит пептон с химически определённым составом; такая замена предназначена для исключения рисков BSE/TSE, связанных с животными пептонами.

Методика работы с образцами воды

При сборе проб воды, их обработке и проведении анализа необходимо применять соответствующие методы отбора проб, процедуры обработки и требования местных нормативных документов.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

1. Среда является селективной; отдельные штаммы могут демонстрировать слабый рост из-за высокой токсичности цетримина.
2. Для полной идентификации необходимо провести дополнительные биохимические тесты.
3. Некоторые штаммы P. aeruginosa могут не продуцировать пиоцианин.
4. Некоторые виды Pseudomonas и отдельные неферментирующие микроорганизмы могут быть подавлены средой.
5. Пигментация и флуоресценция не являются достаточными признаками для окончательной идентификации; результаты подтверждают биохимическими и серологическими методами.
6. P. aeruginosa может временно утрачивать флуоресценцию после нахождения культуры при комнатной температуре; флуоресценция восстанавливается после повторной инкубации.

Контроль качества

Внешний вид

Кремовый или жёлтый однородный сыпучий порошок.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с гелем 1,5 % агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется опалесцирующий гель светло-янтарного цвета с небольшим количеством осадка.

Реакция

Реакция 4,67 % масс./об. водного раствора, содержащего 1 % глицерина, при 25 °C.
pH: 7,2 ± 0,2.

pH

7,00–7,40.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 30–35 °C в течение 18–72 ч. Степень восстановления принимают за 100 % для роста бактер