HiMedia MCD021-100G Трехсахарный железный HiCynth агар

Питательная агаризованная среда HiMedia MCD021-100G Трехсахарный железный HiCynth агар — сухая химически определённая среда для дифференциации грамотрицательных кишечных палочек по ферментации декстрозы, лактозы и сахарозы и образованию сероводорода. Среда применяется для идентификации энтеробактерий и контроля продукции, при этом отрицательная реакция на H₂S возможна у отдельных штаммов Salmonella и других бактерий.

Назначение и область применения

Трехсахарный железный HiCynth агар предназначен для идентификации грамотрицательных кишечных палочек на основании:

• ферментации декстрозы;
• ферментации лактозы;
• ферментации сахарозы;
• образования сероводорода (H₂S);
• образования газа.

Среда применяется для идентификации представителей семейства Enterobacteriaceae, а также при:

• микробиологическом исследовании мяса и пищевых продуктов;
• микробиологическом исследовании молока и молочных продуктов;
• подтверждении присутствия Salmonella при испытаниях на микробиологические пределы;
• идентификации грамотрицательных палочек.

Методику следует применять параллельно с мочевинным агаром или бульоном для дифференциации видов Salmonella и Proteus.

Состав

Состав среды на 1 л:

* Пептоны с химически определённым составом.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Принцип измерения и интерпретация

Трехсахарный железный агар первоначально предложен Sulkin и Willett и модифицирован Hajna для идентификации энтеробактерий. В среде HiCynth™ используются пептоны с химически определённым составом, не содержащие пептонов животного и растительного происхождения. Такая рецептура исключает риски, связанные с пептонами животного происхождения, включая губчатую энцефалопатию крупного рогатого скота и трансмиссивную губчатую энцефалопатию (BSE/TSE).

Функции компонентов:

• пептоны HiCynth™ № 1 и № 6 обеспечивают азотистые и углеродистые соединения, серу, микроэлементы и витамины группы B;
• хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие;
• лактоза, сахароза и декстроза являются сбраживаемыми углеводами;
• тиосульфат натрия и ионы железа формируют индикаторную систему для выявления H₂S;
• феноловый красный служит индикатором pH;
• соли железа реагируют с образующимся H₂S с формированием нерастворимого чёрного осадка сульфида железа(II).

Бактерии, ферментирующие глюкозу, образуют различные кислоты, вследствие чего цвет среды изменяется с красного на жёлтый. В столбике среды при ферментации высвобождается больше кислот, чем на скошенной части, где преобладают аэробные процессы и дыхание. Растущие бактерии также образуют щелочные продукты окислительного декарбоксилирования пептонов. Эти щелочные продукты нейтрализуют значительное количество кислоты в столбике.

Щелочная скошенная часть красного цвета и кислый жёлтый столбик после инкубации указывают, что микроорганизм ферментирует глюкозу, но не способен ферментировать лактозу и/или сахарозу.

Бактерии, ферментирующие лактозу или сахарозу либо оба углевода одновременно, дополнительно к глюкозе образуют большое количество кислоты. В соответствующей области pH не возвращается к исходному значению, поэтому наблюдаются кислая скошенная часть и кислый столбик. При ферментации всех трёх сахаров — глюкозы, лактозы и сахарозы — также формируются кислая скошенная часть и кислый столбик.

Образование газа выявляют по трещинам или пузырькам в среде, возникающим при выходе накопившегося газа. Газ представляет собой CO₂ и другие продукты газообразования.

Некоторые виды бактерий восстанавливают тиосульфат до сероводорода. Сероводород соединяется с ионами железа из солей железа с образованием нерастворимого чёрного осадка сульфида железа(II). Восстановление тиосульфата происходит только в кислой среде, поэтому почернение обычно наблюдается в столбике пробирки.

Реакции интерпретируют следующим образом:

• щелочная скошенная часть / кислый столбик — ферментируется только глюкоза;
• кислая скошенная часть / кислый столбик — ферментируются глюкоза и сахароза, либо глюкоза и лактоза, либо все три сахара: глюкоза, лактоза и сахароза;
• наличие пузырьков или трещин — образование газа;
• наличие чёрного осадка — образование H₂S.

Некоторые представители Enterobacteriaceae и продуцирующие H₂S штаммы Salmonella могут не давать положительную реакцию на H₂S на трехсахарном железном агаре HiCynth™. Некоторые бактерии могут образовывать H₂S на железном агаре Клиглера HiCynth™, но не на трехсахарном железном агаре HiCynth™. Это может быть связано с тем, что использование сахарозы в трехсахарном железном агаре HiCynth™ подавляет ферментативный путь, приводящий к образованию H₂S.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 64,52 г сухой среды в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Тщательно перемешайте.
4. Распределите среду по пробиркам.
5. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов давления, что соответствует приблизительно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
6. Дайте среде застыть в наклонном положении, сформировав скошенную часть и столбик длиной приблизительно 25,4 мм (1″).

Для получения более стабильных результатов среду допускается стерилизовать автоклавированием при давлении 10 фунтов давления, что соответствует приблизительно 0,069 МПа, при 115 °C в течение 15 мин.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный, сыпучий порошок от светло-жёлтого до розового цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,2%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: в пробирках в виде скошенного агара образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель розовато-красного цвета.
• Реакция: реак