HiMedia M972-100G Желчно-эскулиновый агар

Питательная микробиологическая среда HiMedia M972-100G Желчно-эскулиновый агар представляет собой порошковый агар с конечным pH 6,6 ± 0,2. Среда предназначена для выделения и предположительной идентификации стрептококков группы D из пищевых и фармацевтических продуктов, включая контроль энтерококков по гидролизу эскулина.

Назначение и область применения

Желчно-эскулиновый агар рекомендован для выделения и предположительной идентификации стрептококков группы D из пищевых и фармацевтических продуктов.

Тип образца: пищевые образцы.

Для пищевых и молочных образцов необходимо применять соответствующие методики отбора и обработки проб согласно действующим лабораторным руководствам. После использования загрязнённые материалы перед утилизацией стерилизуют автоклавированием.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Пептон HM B эквивалентен мясному экстракту. Желчь эквивалентна бычьей желчи.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 64,5 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Перемешайте и разлейте в пробирки или колбы необходимого типа.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/дюйм² (≈0,10 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Оставьте среду в пробирках для затвердевания в наклонном положении.

Принцип действия и интерпретация

Стрептококки группы D обладают антигеном группоспецифической липотейхоевой кислоты в клеточной стенке. Представители ранее выделявшейся группы D, являющиеся обычными обитателями желудочно-кишечного тракта человека, называются фекальными стрептококками или энтерококками.

Уникальная способность энтерококков расщеплять эскулин была описана Meyer и Schonfeld. Энтерококки и стрептококки группы D гидролизуют эскулин с образованием эскулетина и декстрозы; эскулетин реагирует с цитратом железа с образованием коричневато-чёрного осадка. Использование гидролиза эскулина для идентификации энтерококков впервые описал Rochaix. Желчно-эскулиновый агар был первоначально разработан Swan для выделения и идентификации стрептококков группы D из пищевых продуктов. Facklam и Moody показали, что с использованием желчно-эскулинового агара стрептококки группы D можно дифференцировать со стрептококками, не относящимися к группе D.

Желчно-эскулиновый агар также способствует дифференциации представителей Enterobacteriaceae, Klebsiella, Enterobacter и Serratia от других родов семейства Enterobacteriaceae на основании гидролиза эскулина. Для идентификации энтерококков необходимо дополнительно выполнять другие тесты, например тест на устойчивость к соли.

Среда обладает высокой питательной ценностью. Пептон и пептон HM B служат источниками углерода, азота, аминокислот, витаминов и других необходимых для роста питательных веществ. Желчь подавляет большинство сопутствующих бактерий. Эскулин в составе среды гидролизуется до эскулетина и декстрозы. Эскулетин реагирует с цитратом железа с образованием тёмно-коричневого или чёрного комплекса, который визуализируется как зона чёрного осадка вокруг колоний.

При разливе среды в пробирки в виде скошенного агара положительная реакция определяется по почернению более половины поверхности скоса в течение 24–48 ч. Если почернение полностью отсутствует или за 24–48 ч почернело менее половины скоса, результат теста отрицательный.

Стрептококки группы viridans иногда дают слабую положительную реакцию. Виды Leuconostoc, Pediococcus и Lactococcus, вызывающие инфекции у человека, также дают положительный результат желчно-эскулинового теста.

Для усиления роста энтерококков желчно-эскулиновый агар можно дополнить конской сывороткой в количестве 50 мл/л. Исследуемый образец инокулируют и инкубируют в бульоне Тодда—Хьюитта (M313). Через 24 ч инкубации две капли культуры наносят на поверхность скошенной среды или чашки со средой.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: однородный, легко сыпучий порошок от светло-жёлтого до коричневато-жёлтого цвета.

Гелеобразование

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность: в чашках Петри или пробирках в виде скошенного агара образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель янтарного цвета с голубоватым оттенком.

Реакция и pH

Реакция: реакция 6,5%-ного водного раствора при 25 °C.

pH: 6,6 ± 0,2.

Диапазон pH: 6,40–6,80.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают в атмосфере с повышенным содержанием углекислого газа после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Условия хранения и срок годности

Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C.

Храните продукт в плотно закрытой ёмкости, а приготовленную среду — при 20–30 °C. Используйте продукт до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом виде для предотвращения образования комков из-за гигроскопичности порошка. Неправильное хранение может привести к комкованию продукта.

Условия хранения: сухое вентилируемое помещение, защищённое от экстремальных температур и источников воспламенения. После каждого использования ёмкость следует плотно закрывать.

Рабочие характеристики среды сохраняются при использовании в течение указанного срока годности и соблюдении рекомендованной температуры хранения.

Ограничения применения

Среда является средой общего назначения и может не поддерживать рост требовательных микроорганизмов.

Меры предосторожности

Перед открытием контейнера прочитайте этикетку.

При работе используйте:

• защитные перчатки;
• защитную одежду;
• средства защиты глаз;
• средства защиты лица.

При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики. При работе с образцами необходимо соблюдать стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами. Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Утилизация

Пользователь обязан обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов посредством автоклавирования и/или сжигания.

Утилизацию инфекционных материалов необходимо выполнять в соответствии с установленными лабораторными процедурами. Материалы, контактировавшие с образцами, должны быть обеззаражены и утилизированы согласно действующим лабораторным методикам.

Технические характеристики