Порошкообразная питательная среда HiMedia M962-5KG Агар R2A предназначена для микробиологического определения общего количества гетеротрофных микроорганизмов в пробах воды. Среда с низким содержанием питательных веществ применяется при увеличенных сроках инкубации для восстановления стрессированных и повреждённых микроорганизмов; масса упаковки — 5 кг.

Назначение

Среда R2A Agar предназначена для определения общего количества гетеротрофных микроорганизмов в пробах воды методом посева на чашки при увеличенных сроках инкубации. Методика позволяет оценивать количество жизнеспособных гетеротрофных бактерий и изменения их количества при водоподготовке, в распределительных системах и плавательных бассейнах.

R2A Agar рекомендована Американской ассоциацией общественного здравоохранения (APHA) для определения общего количества гетеротрофных микроорганизмов методами заливки чашек, поверхностного посева или мембранной фильтрации. Рецептура среды разработана по Reasoner и Geldreich.

Стрессированные или повреждённые микроорганизмы, подвергшиеся воздействию процессов водоподготовки, могут не расти на средах с высоким содержанием питательных веществ, поскольку быстрорастущие микроорганизмы подавляют их рост. Среда с низким содержанием питательных веществ и увеличенным сроком инкубации создаёт условия для восстановления и роста таких микроорганизмов.

Многие бактерии из природных вод с ограниченным содержанием питательных веществ лучше растут на средах с пониженным уровнем питательных компонентов и при температурах ниже стандартных лабораторных условий инкубации 35–37 °C.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения установленных рабочих характеристик.

Acicase эквивалентен кислотному гидролизату казеина.

Принцип действия и интерпретация

Гетеротрофный чашечный подсчёт, ранее называвшийся стандартным чашечным подсчётом, представляет собой процедуру оценки количества живых гетеротрофных бактерий в воде и контроля изменений их количества при водоподготовке, в распределительных системах или плавательных бассейнах.

Функции компонентов среды:

• Acicase, пептон протеозы и дрожжевой экстракт обеспечивают источник азота, углеродистых соединений, витаминов, аминокислот и минеральных веществ.
• Декстроза (глюкоза) служит источником энергии.
• Растворимый крахмал способствует восстановлению повреждённых микроорганизмов за счёт поглощения токсичных побочных продуктов метаболизма.
• Пируват натрия повышает восстановление стрессированных клеток.
• Сульфат магния является источником двухвалентных катионов и сульфата.
• Дикалия гидрофосфат используется для стабилизации pH среды.

Количество колоний на чашке выражают в КОЕ — колониеобразующих единицах — на объём исследуемой пробы.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 18,12 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (ориентировочно ≈0,103 МПа или ≈1,03 бар) и температуре 121 °C в течение 15 мин либо в соответствии с валидированным циклом стерилизации.
4. Не перегревайте среду.
5. Охладите среду до 45–50 °C.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Исследуемый материал

Тип образца: пробы воды.

Отбор и обращение с образцами

Для проб воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов согласно действующим руководствам и местным нормативным требованиям.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность: в чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-жёлтого цвета.

Реакция среды

Условия определения: водный раствор 1,81 % масс./об. при 25 °C.

Реакция среды: pH 7,2 ± 0,2.

Диапазон pH

Диапазон pH: 7,00–7,40.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определены с использованием стандартных культур ATCC после инкубации при 30–35 °C в течение 24–72 ч.

Для проб воды, отобранных в полевых условиях, рекомендуется продолжить инкубацию до 7 суток, чтобы подтвердить отсутствие микроорганизмов.

• В скобках приведены соответствующие номера WDCM.

Bacillus spizizenii ранее обозначался как Bacillus subtilis subsp. spizizenii.

Pseudomonas paraeruginosa ранее обозначался как Pseudomonas aeruginosa.

Aspergillus brasiliensis ранее обозначался как Aspergillus niger.

Ограничения применения

1. Для медленнорастущих микроорганизмов требуется более длительная инкубация, чем установленный стандартный период.
2. Среда предназначена для проб воды и восстановления стрессированных или повреждённых микроорганизмов.

Рабочие характеристики

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухой среды: 10–30 °C.
• Условия хранения приготовленной среды: 20–30 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия плотно закройте контейнер и храните продукт в сухом виде.
• Защищайте порошок от влаги: продукт обладает гигроскопичностью, поэтому при неправильном хранении возможно образование комков.
• Храните в сухом проветриваемом помещении, защищ