Агар для качественной и количественной оценки лактококков HiMedia M926-500G (уп/500 гр)

Диагностическая дифференциальная среда Агар для качественной и количественной оценки лактококков HiMedia M926-500G (уп/500 гр) производства HiMedia. Применяется для количественного исследования и дифференциации молочнокислых стрептококков; имеет сертификат ФСЗ 2009/03705.

Принцип измерения и интерпретация

Среда предназначена для дифференциации молочнокислых стрептококков, в частности Lactococcus lactis и его подвидов cremoris и diacetylactis. Дифференциация основана на гидролизе аргинина, а также определении диацетила и ацетоина. Данная модификация среды (Lactic Streak Agar) рекомендована APHA для дифференциального подсчета лактококков.

Интерпретация результатов:

• Ферментация лактозы: микроорганизмы, ферментирующие лактозу, вырабатывают кислоту, что приводит к формированию жёлтых колоний.
• Lactococcus lactis: изначально вырабатывает кислоту (жёлтый цвет), но затем колонии приобретают фиолетово-пурпурный цвет из-за высвобождения аммиака при гидролизе аргинина.
• Lactococcus lactis subspecies diacetylactis: формирует более интенсивный пурпурный цвет, чем Lactococcus lactis. Данный подвид утилизирует суспендированный цитрат кальция, в результате чего вокруг колоний образуются прозрачные зоны на фоне мутной среды.

Компоненты среды:

• Пептон, соевый пептон, дрожжевой экстракт и HM пептон B: источники углерода, азота, аминокислот и витаминов.
• Лактоза: ферментируемый углевод.
• L-аргинин и цитрат кальция: специфические субстраты для дифференциации.
• Бромкрезоловый пурпурный: pH-индикатор.

Состав

Состав, г/л:

Методика приготовления и использования

Приготовление среды

1. Суспендировать 58,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды, перемешать с помощью блендера.
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 115 °C в течение 10 минут (давление $\approx 0,07$ МПа).
4. Охладить до 45–50 °C, тщательно перемешать и разлить по стерильным чашкам Петри.

Пробоподготовка и анализ

• Типы образцов: клинические образцы (слизистая оболочка кишечника), образцы пищевых продуктов.
• Процедура: для количественного определения готовят десятикратные разведения культур, которые затем высевают на поверхность агара.
• Инкубация и подсчёт:
  1. После инкубации при 32 °C в течение 36–40 часов подсчитывают жёлтые колонии подвида cremoris.
  2. Чашки инкубируют далее до 4 суток.
  3. Подсчитывают общее количество колоний с прозрачными зонами (подвид diacetylactis).
  4. Количество колоний diacetylactis вычитают из общего числа для определения популяции Lactococcus lactis в смеси.

Технические характеристики

Контроль качества

• Внешний вид: однородный свободнотекучий порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,5% агаром.
• Цвет и прозрачность готовой среды: светло-жёлтая опалесцирующая среда с зеленоватым оттенком в чашках Петри.
• Реакция: pH 6,0 ± 0,2 (для 5,8% в/в водного раствора при 25 °C).
• Диапазон pH: 5,80–6,20.

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются после инкубации при 32 °C в течение до 4 суток.

Дополнительные параметры

Ограничения и предостережения

• Для предотвращения ошибочных результатов необходимо использовать хорошо изолированные колонии.
• Для подтверждения результатов следует проводить биохимические и серологические тесты.
• Только для профессионального использования в In Vitro диагностике.
• При работе с образцами соблюдать стандартные правила микробиологической безопасности и использовать средства индивидуальной защиты (перчатки, одежда, защита глаз и лица).

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C в сухом вентилируемом месте, вдали от источников возгорания.
• Хранение готовой среды: при температуре 20–30 °C.
• Особенности: из-за гигроскопичности продукта после вскрытия флакон необходимо плотно закрывать во избежание образования комков.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты подлежат безопасному удалению путём автоклавирования и/или сжигания в соответствии с установленными лабораторными процедурами по обращению с инфекционными материалами.