Основа дифференциальной среды для C.perfringens HiMedia M919-500G (уп/500 гр)

Питательная среда «Основа дифференциальной среды для C.perfringens HiMedia M919-500G (уп/500 гр)» — порошковая основа дифференциальной среды массой 500 г для Clostridium perfringens. Применяется для изучения ферментации углеводов и определения кислотопродукции C. perfringens; требует добавления стерильных растворов салицина и раффинозы и анаэробного культивирования.

Назначение

Основа среды предназначена для изучения ферментации Clostridium perfringens с добавлением углеводов. Среда помогает идентифицировать C. perfringens среди других видов рода Clostridium по образованию кислоты из углеводов.

• Тип питательной среды: дифференциальная
• Назначение изделия: основа
• Масса: 500 г
• Сертификат: ФСЗ 2009/03705
• Применение: диагностическое применение in vitro, только для профессионального использования
• Тип образцов: клинический материал — кал, содержимое абсцессов; пищевые образцы

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Принцип действия и интерпретация

Загрязнение пищевых продуктов клостридиями в значительной степени происходит из почвы и обычно связано с пищевыми отравлениями, вызываемыми Clostridium perfringens. Спорулирующие клетки продуцируют термолабильный энтеротоксин, вызывающий основные симптомы диареи при отравлении C. perfringens. Энтеротоксин не образуется заранее в пищевых продуктах, однако продукты, в которых создаются благоприятные условия для споруляции, могут содержать энтеротоксин.

Клостридии являются распространёнными загрязнителями пищевых продуктов и могут вызывать порчу консервов, охлаждённых продуктов и других пищевых материалов.

Основа ферментационной среды для C. perfringens разработана Spray и рекомендована APHA для определения ферментационных реакций C. perfringens. Триптон и специальный пептон обеспечивают необходимые питательные вещества для роста. Тиогликолят натрия создаёт в среде низкое содержание кислорода, необходимое для роста анаэробных организмов.

Дифференциацию C. perfringens от других клостридий проводят по образованию кислоты из углеводов:

• салицин быстро ферментируется клостридиями, отличными от C. perfringens;
• C. perfringens образует кислоту из раффинозы в течение 3 суток, что не характерно для других видов.

Для определения кислотообразования к культуре добавляют бромтимоловый синий: жёлтая окраска указывает на образование кислоты.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 22,25 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Разлейте по 9 мл в пробирки размером 16 × 125 мм, содержащие перевёрнутые трубки Дюрхема.
4. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C в течение 15 мин; ориентировочное давление — 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа).
5. Непосредственно перед использованием прогрейте среду в кипящей водяной бане или в потоке свободно проходящего пара в течение 10 мин для удаления растворённого кислорода.
6. Добавьте по 1 мл стерильных 1%-ных растворов углеводов — салицина и раффинозы — в отдельные пробирки.

Пробоподготовка и проведение анализа

1. Внесите приблизительно 2 г пищевого образца в 15–20 мл CL-бульона M606.
2. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 20–24 ч.
3. Выполните посев на триптозо-сульфит-циклосериновую агаровую основу (T.S.C.) M837 с эмульсией яичного желтка FD045 для предварительного выявления Clostridium perfringens.
4. Отберите характерные чёрные колонии и внесите их в жидкую тиогликолевую среду M009.
5. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 18–24 ч.
6. Выполните окраску по Граму и пересейте культуру на триптозо-сульфит-циклосериновую агаровую основу (T.S.C.) M837.
7. Инкубируйте анаэробно при 35–37 °C в течение 18–24 ч для получения изолированных колоний.
8. Пробирки с жидкой тиогликолевой средой M009 можно дополнительно использовать для подтверждения C. perfringens посредством биохимической идентификации, включая ферментацию углеводов.
9. Для проверки образования кислоты перенесите 1 мл культуры из основы ферментационной среды для C. perfringens, содержащей салицин или раффинозу, в пробирку и добавьте 2 капли 0,04%-ного бромтимолового синего.
10. Жёлтая окраска указывает на образование кислоты.

После использования загрязнённые материалы перед утилизацией необходимо стерилизовать в автоклаве.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют в анаэробных условиях после добавления 1%-ных растворов салицина и раффинозы в две отдельные пробирки со средой и инкубации при 35–37 °C в течение 24–72 ч. Образование кислоты проверяют добавлением 0,04%-ного бромтимолового синего.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: однородный, сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Гелеобразование: полутвёрдая консистенция, сопоставимая с 0,2%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность приготовленной среды: светло-янтарный прозрачный раствор без осадка.

Реакция среды

Реакция: для водного раствора с массовой концентрацией 2,22 % при 25 °C.

• pH по реакции: 7,4 ±