Основа дифференциальной среды для C.perfringens HiMedia M919-500G (уп/500 гр)

Основа дифференциальной среды для C. perfringens HiMedia M919-500G (уп/500 г) производства HiMedia. Применяется для изучения ферментативных реакций Clostridium perfringens с добавлением углеводов; сертификат ФСЗ 2009/03705.

Область применения

Среда предназначена для идентификации Clostridium perfringens и дифференциации данного вида от других клостридий на основании способности вырабатывать кислоту при ферментации конкретных углеводов. Используется при анализе:

• клинических образцов (кал, абсцессы);
• пищевых продуктов (контроль порчи консервов, охлажденной продукции).

Принцип измерения

Основа среды разработана по методике Spray и рекомендована APHA. Триптон и специальный пептон обеспечивают необходимые питательные вещества для роста. Тиогликоллат натрия создает условия низкого парциального давления кислорода, что способствует росту анаэробных организмов.

Дифференциация основана на способности C. perfringens ферментировать раффинозу с образованием кислоты в течение 3 суток, в то время как другие виды клостридий обычно быстро ферментируют салицин.

Методика проведения анализа

Подготовка среды

1. Растворить 22,25 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов.
3. Разлить по 9 мл в пробирки размером 16 × 125 мм, содержащие перевернутые трубки Дюрама.
4. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут.
5. Непосредственно перед использованием прогреть в кипящей воде или потоке пара в течение 10 минут для удаления растворенного кислорода.
6. Добавить в отдельные пробирки по 1 мл стерильных 1 % растворов углеводов (салицина и раффинозы).

Пробоподготовка и посев

1. Внести около 2 г образца продукта в 15–20 мл бульона CL (M606). Инкубировать при 35–37 °C в течение 20–24 часов.
2. Высеять на агар T.S.C. (M837) с эмульсией яичного желтка (FD045) для получения предполагаемых колоний C. perfringens.
3. Отобрать репрезентативные черные колонии и инокулировать в среду Fluid Thioglycollate (M009). Инкубировать при 35–37 °C в течение 18–24 часов.
4. Провести окраску по Грамму и выделить чистую культуру на агаре T.S.C. (M837), инкубируя в анаэробных условиях при 35–37 °C в течение 18–24 часов.
5. Использовать культуру из пробирок Fluid Thioglycollate (M009) для биохимической идентификации, включая ферментацию углеводов в среде M919.

Интерпретация результатов

Для определения продукции кислоты перенести 1 мл культуры из среды M919 (с салицином или раффинозой) в отдельную пробирку и добавить 2 капли 0,04 % раствора бромтимолового синего. Появление жёлтого окрашивания свидетельствует о продукции кислоты.

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются в анаэробных условиях при добавлении 1 % растворов салицина и раффинозы в отдельные пробирки после инкубации при 35–37 °C в течение 24–72 часов. Проверка продукции кислоты проводится путем добавления 0,04 % бромтимолового синего.

Технические характеристики

Состав, г/л:

Дополнительные параметры:

Контроль качества:

• Внешний вид: однородный свободно текущий порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Желирование: полутвердое, сопоставимо с гелем 0,2 % агара.
• Цвет и прозрачность готовой среды: светло-янтарный, прозрачный раствор без осадка.
• Реакция: pH 7,4 ± 0,2 для 2,22 % (масса/объем) водного раствора при 25 °C.
• Диапазон pH: 7,20–7,60.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C.
• Хранение готовой среды: при температуре 15–30 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, необходимо плотно закрывать флакон для предотвращения комкования. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Ограничения и меры предосторожности

• Среда предназначена только для профессионального использования in vitro.
• Для окончательной идентификации необходимо проведение дополнительных биохимических и серологических тестов.
• При работе с клиническими образцами соблюдать стандартные меры предосторожности и использовать средства индивидуальной защиты (перчатки, одежда, защита глаз и лица).
• Отработанные материалы должны быть стерилизованы в автоклаве перед утилизацией.