Основа дигидролазного бульона HiMedia M915-500G (уп/500 гр)

Основа питательной среды HiMedia M915-500G предназначена для изучения дигидролазной реакции у Vibrio parahaemolyticus и выпускается в виде порошка в упаковке 500 г. Продукт применяют для анализа чистых изолятов из клинических и пищевых образцов, при этом положительную реакцию необходимо подтверждать в базовой среде без L-аргинина и защищать инокулированные пробирки от воздуха стерильным минеральным маслом.

Назначение

Основа дигидролазного бульона HiMedia M915-500G рекомендована для изучения дигидролазной реакции у Vibrio parahaemolyticus. Тип питательной среды: диагностический. Назначение изделия: основа. Сертификат: ФСЗ 2009/03705.

Тип образца:

• чистые изоляты из клинических образцов;
• чистые изоляты из пищевых образцов.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Методика приготовления среды

1. Взвесьте 43,03 г порошка и суспендируйте в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте суспензию для полного растворения среды.
3. Разделите приготовленную среду на две части.
4. В первую часть добавьте 0,5 % L-аргинина.
5. Вторую часть используйте в качестве базового бульона-контроля без L-аргинина.
6. Полностью растворите компоненты и разлейте среду по 3,0 мл в пробирки с винтовой крышкой размером 13 × 100 мм.
7. Стерилизуйте автоклавированием при 115 °C в течение 15 мин.

Давление, соответствующее режиму A115 °C, составляет примерно 10 фунтов на кв. дюйм (≈0,069 МПа).

Принцип действия и интерпретация

Вибрионы сравнительно легко выделяются из клинического материала и объектов окружающей среды, однако для роста некоторых видов могут потребоваться факторы роста и/или витамины. Vibrio parahaemolyticus является основной причиной бактериальной диареи, связанной с употреблением загрязнённых пищевых продуктов.

Основа дигидролазного бульона сформулирована в соответствии с методикой APHA и применяется для изучения дигидролазной реакции у Vibrio parahaemolyticus.

Декстроза используется видами Vibrio. Снижение pH выявляется по изменению окраски индикатора бромкрезолового пурпурного: среда приобретает жёлтую окраску. В среду добавляют L-аргинин как субстрат для дигидролазной реакции.

Фермент дигидролаза превращает L-аргинин в путресцин. При этом путресцин также может образовываться из аргинина в результате работы декарбоксилазной системы:

1. L-аргинин подвергается декарбоксилированию с образованием агматина.
2. Агматин катаболизируется ферментом агматиндегидролазой.
3. В ходе реакции через промежуточное соединение монокарбаминилпутресцин образуются путресцин, CO₂ и аммиак.

Образование в среде амина, такого как путресцин, повышает pH и изменяет цвет индикатора с жёлтого на пурпурный. Бромкрезоловый пурпурный является индикатором pH и изменяет окраску с жёлтой на пурпурную в щелочной среде.

Для подтверждения результата рекомендуется инокулировать пробирку с базовой средой, не содержащей L-аргинин. Подщелачивание поверхности среды может быть вызвано воздействием воздуха, поэтому дигидролазонегативный организм может быть ошибочно идентифицирован как положительный. Для защиты инокулированных пробирок от воздуха рекомендуется покрывать среду слоем стерильного минерального масла.

Функции компонентов:

• пептон и дрожжевой экстракт обеспечивают азотистые питательные вещества, необходимые для роста бактерий;
• декстроза является сбраживаемым углеводом;
• хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления 0,5 % L-аргинина и инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Обозначения:

• * — соответствующие номера WDCM;
• # — прежнее название Enterobacter aerogenes.

Контроль качества

Внешний вид:

• порошок от светло-жёлтого до зеленовато-жёлтого цвета;
• однородный;
• сыпучий.

Цвет и прозрачность приготовленной среды: раствор пурпурного цвета, прозрачный, без осадка.

Реакция: реакция 4,3 % водного раствора при 25 °C.

pH:

• заявленное значение: 6,8 ± 0,2;
• диапазон: 6,60–7,00.

Технические характеристики

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с пробами согласно установленным методическим рекомендациям.

Для пищевых образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно действующим рекомендациям.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

Инокулированные пробирки рекомендуется защищать от воздуха слоем стерильного минерального масла. Воздействие воздуха может вызвать подщелачивание поверхности среды и привести к ошибочной идентификации дигидролазонегативного организма как положительного.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения порошка: 10–30 °C.
• Температура хранения приготовленной среды: 15–30 °C.
• Условия хранения: в плотно закрытой ёмкости, в сухом проветриваемом помещении.
• Защита при хранении: от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После вскрытия флакон необходимо плотно закрывать и хранить продукт в сухом состоянии.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• Для сохранения рабочих характеристик продукт следует использовать в пределах установленного срока годности.

Гигроскопичность порошка может привести к образованию комков. Неправильное хранение также может вызывать комкование.

Требования безопасности

Продукт предназначен для диагностики in vitro и профессионального применения.

Перед вскрытием контейнера необходимо ознакомиться с этикеткой. При работе следует использовать:

• защитные перчатки;
• защитную одежду;
• средства защиты глаз;
• средства защиты лица.

При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики. Для клинических образцов необходимо соблюдать стандартные меры предосторожности согласно установленным рекомендациям. Дополнительные требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Оценка рабочих характеристик

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Утилизация

Пользователь обязан обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов посредством автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов необходимо соблюдать утверждённые лабораторные процедуры. Материал, контактировавший с клиническими образцами, должен быть обеззаражен и утилизирован в соответствии с действующими лабораторными методами.