Основа среды для тестов на декарбоксилазу (Фалькоу) HiMedia M912-500G (уп/500 гр)

Основа питательной среды для тестов на декарбоксилазу (Фалькоу) HiMedia M912-500G (уп/500 гр) — порошковая диагностическая среда с конечным pH 6,8±0,2. Среда предназначена для определения декарбоксилазной активности микроорганизмов при исследовании чистых культур, но может не поддерживать рост требовательных микроорганизмов.

Назначение

Основа среды HiMedia M912-500G предназначена для определения способности микроорганизмов декарбоксилировать аминокислоты. Для проведения теста в основу отдельно добавляют L-лизина гидрохлорид, L-аргинина гидрохлорид и L-орнитина гидрохлорид до конечной концентрации 0,5 %.

Тип питательной среды: диагностический
Назначение изделия: основа
Тип применения: диагностика in vitro
Сертификат: ФСЗ 2009/03707
Тип образца: пищевые образцы — чистые изоляты; клинические образцы

Состав

Состав среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения установленных рабочих параметров.

Принцип действия и интерпретация

Основа среды для тестов на декарбоксилазу применяется для дифференциации бактерий по способности декарбоксилировать аминокислоты.

Практическое применение теста на декарбоксилазную активность аминокислот впервые описал Moeller для различения различных микроорганизмов. Работа Moeller основывалась на исследованиях бактериальных декарбоксилаз аминокислот, выполненных Gale, а также Gale и Epps. Moeller установил, что образование декарбоксилаз лизина, аргинина и орнитина различными представителями семейства Enterobacteriaceae является важным дополнительным параметром к другим биохимическим тестам при дифференциации близкородственных групп бактерий.

Для дифференциации серотипа Salmonella Arizonae и рода Citrobacter Calquist разработал среду, использующую реакцию декарбоксилирования лизина. Позднее Falkow разработал и усовершенствовал среду для определения декарбоксилазы лизина при дифференциации Salmonellae и Shigella, обеспечив получение воспроизводимых результатов.

Энтеробактерии ферментируют декстрозу, что приводит к снижению pH и закислению среды. Бактерии, образующие декарбоксилазу лизина, орнитина или аргинина, продуцируют щелочные продукты, повышающие pH среды. Реакцию оценивают через 24–96 ч:

• у бактерий, продуцирующих декарбоксилазу, среда приобретает фиолетовую окраску, соответствующую щелочной реакции;
• у бактерий, не продуцирующих декарбоксилазу, наблюдается кислая реакция и жёлтая окраска среды.

Инокулированные пробирки необходимо защищать от контакта с воздухом, покрывая поверхность среды стерильным минеральным маслом. Это предотвращает ложное защелачивание поверхностного слоя среды. Контрольные пробирки с базовой средой также необходимо инокулировать.

Биохимическое исследование следует проводить только с чистой выделенной культурой и после выполнения дифференциальных определений. Реакции декарбоксилазы могут служить ориентировочным признаком рода или вида, однако окончательная идентификация микроорганизма не может быть выполнена только на основании реакций декарбоксилирования.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 9,02 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте суспензию до полного растворения среды.
3. Разделите приготовленный объём на четыре равные части.
4. Одну часть разлейте в пробирки без добавления аминокислот — это контрольная базовая среда.
5. В каждую из оставшихся трёх частей отдельно добавьте одну из трёх аминокислот: L-лизина гидрохлорид, L-аргинина гидрохлорид или L-орнитина гидрохлорид.
6. Доведите конечную концентрацию каждой добавленной аминокислоты до 0,5 %.
7. Разлейте среды в пробирки с завинчивающимися крышками порциями по 3–4 мл.
8. Стерилизуйте автоклавированием при температуре 121 °C в течение 15 мин и давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа).
9. Для предотвращения ложного защелачивания поверхности среды перед стерилизацией рекомендуется добавить жидкий парафин слоем высотой около 5 мм.

Проведение и оценка теста

После инокуляции пробирки инкубируют при 35–37 °C до 4 суток с добавлением соответствующей аминокислоты и покрытием поверхности стерильным минеральным маслом.

Фиолетовая окраска указывает на щелочную реакцию и образование декарбоксилазы исследуемой аминокислоты. Жёлтая окраска указывает на кислую реакцию и отсутствие декарбоксилазной активности. Для контроля одновременно инокулируют пробирку с базовой средой без аминокислоты.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методики обращения с материалом согласно установленным руководствам.

Для пищевых образцов применяйте соответствующие методики отбора и обработки проб согласно действующим руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или зеленовато-жёлтый однородный сыпучий порошок без комков.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Прозрачный раствор фиолетового цвета без осадка в пробирках.

Реакция водного раствора

Реакция водного раствора с концентрацией 0,9 % масс./об. при 25 °C:

pH: 6,8±0,2

Диапазон pH

pH: 6,60–7,00

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение не более 4 суток с добавлением соответствующих аминокислот и покрытием поверхности стерильным минеральным маслом.