HiMedia M902F-500G Основа анаэробного яичного агара

Питательная среда HiMedia M902F-500G Основа анаэробного яичного агара — порошковая основа с содержанием агара 20,000 г/л для приготовления среды с яичной эмульсией. Применяется для выявления Clostridium botulinum в пищевых продуктах и определения липазной и лецитиназной активности микроорганизмов при анаэробном культивировании.

Назначение

Основа анаэробного яичного агара с добавлением эмульсии яичного желтка предназначена для выявления Clostridium botulinum в пищевых продуктах в соответствии с FDA BAM, 1998. Среда также применяется для определения липазной активности Yersinia sp.

Состав

Формула рассчитана и стандартизирована с учётом параметров эффективности.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 55 г сухой основы в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа; около 1,03 бар) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 80 мл стерильной эмульсии яичного желтка FD045F.
6. Тщательно перемешайте перед разливом в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Clostridium занимает третье место после Salmonella и Staphylococcus aureus среди наиболее распространённых этиологических агентов пищевых заболеваний. Clostridium botulinum — анаэробная палочковидная спорообразующая бактерия, продуцирующая ботулинический токсин с характерной нейротоксичностью. Пищевое отравление, вызываемое Clostridium, развивается после употребления заражённых продуктов.

Основа анаэробного яичного агара с добавлением эмульсии яичного желтка рекомендована для выявления Clostridium botulinum в пищевых продуктах, а также для определения липазной активности Yersinia sp. в соответствии с FDA BAM, 1998. Основным фактором вирулентности C. botulinum является ботулинический токсин, который секретируется после проникновения бактерии в кишечник хозяина и может вызывать пищевое отравление, желудочно-кишечные заболевания и смерть.

Казеиновый ферментативный гидролизат и протеозопептон обеспечивают микроорганизмы аминокислотами и другими сложными азотсодержащими питательными веществами. Дрожжевой экстракт поставляет необходимые витамины группы B. Эмульсия яичного желтка FD045F добавляется в среду для визуального определения липазной и лецитиназной активности. Агар выполняет функцию желирующего агента. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие клеток.

Yersinia sp. разлагает лецитин яичного желтка с образованием нерастворимого непрозрачного осадка. Липаза расщепляет свободные жиры, присутствующие в яичном желтке, вследствие чего на поверхности колонии формируется радужный блеск. Протеолиз выявляется по прозрачным зонам в среде вокруг участков роста.

Методика выявления Clostridium botulinum

1. Репрезентативные образцы пищевых продуктов массой 1–2 г для твёрдых образцов или объёмом 1–2 мл для жидких образцов обогащают в среде Cooked Meat M149F в течение не более 5 дней при 35 °C в анаэробных условиях.
2. Вегетативные клетки уничтожают обработкой спиртом или термической обработкой: аликвоту объёмом 1–2 мл нагревают при 80 °C в течение 10–15 мин.
3. Обработанные культуры штриховым методом высевают на модифицированную основу Liver-Veal-Agar Base M1872 или на основу анаэробного яичного агара M902F.
4. Оценивают морфологию колоний. Типичные колонии C. botulinum могут быть приподнятыми, с гладкой или шероховатой поверхностью, расплывающимися и с неровным краем.
5. На среде с яичным желтком колонии C. botulinum обычно демонстрируют поверхностную радужность при наблюдении в косом свете. Эта зона блеска, часто называемая жемчужным слоем, обычно выходит за пределы колонии и повторяет её неровный контур.
6. Вокруг колоний типов C, D и E C. botulinum обычно формируется широкая зона жёлтого осадка размером 2–4 мм.
7. Колонии типов A и B, как правило, образуют меньшую зону осадка.
8. Для дифференциации C. botulinum от других видов Clostridium необходимо провести дополнительные биохимические тесты.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Желирование: прочный гель, сопоставимый с 2,0 % агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Базовая среда: светло-жёлтый прозрачный или от прозрачного до слегка опалесцирующего геля.
• Среда после добавления эмульсии яичного желтка: светло-жёлтый непрозрачный гель, образующийся в чашках Петри.

Реакция среды и pH

• Условия определения: реакция водного раствора с концентрацией 5,5 % масс./об. при 25 °C.
• pH раствора: 7,0 ± 0,2.
• Диапазон pH: 6,80–7,20.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют на среде с добавленной 50 %-ной эмульсией яичного желтка FD045F после анаэробной инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Технические характеристики

• Наименование: основа анаэробного яичного агара.
• Артикул: M902F.
• Производитель: HiMedia.
• Назначение изделия: основа питательной среды.
• Форма выпуска: порошок.
• Масса: 500 г.
• Происхождение: животное.
• Тип продукта: стандартный.
• Тип упаковки: HDPE (полиэтилен высокой плотности).
• Конечный pH при 25 °C: 7,0 ± 0,2.
• Диапазон pH: 6,80–7,20.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухой основы: ниже 30 °C; для продукции из карточки — 10–30 °C.
• Условия хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Упаковка при хранении: плотно закрытая тара.
• Срок использования: до даты окончания срока годности