HiMedia M889-2.5KG Основа селективного бульона для листерий

Порошковая питательная среда HiMedia M889-2.5KG Основа селективного бульона для листерий предназначена для приготовления селективного бульона; масса упаковки — 2,5 кг. Применяется для селективного выделения и культивирования Listeria monocytogenes из клинических образцов, при этом окончательная идентификация выделенных микроорганизмов требует дополнительных методов и биохимических тестов.

Назначение и область применения

Среда рекомендована для селективного выделения и культивирования Listeria monocytogenes из клинических образцов, в частности из фекалий.

Listeria Selective Broth применяют для селективного обогащения видов Listeria из молока, молочных продуктов и других пищевых продуктов. Процедуры обогащения позволяют выделять низкое количество L. monocytogenes, в том числе микроорганизмы, повреждённые воздействием нагревания, замораживания или кислой среды.

Состав

Формула рассчитана и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Принцип действия и интерпретация

Listeria monocytogenes — короткая грамположительная палочковидная бактерия, не образующая спор; в старых культурах клетки могут иметь кокковидную форму.

Listeria размножается в широком диапазоне температур — от 3 до 45 °C; оптимальный диапазон температуры составляет 30–37 °C. L. monocytogenes выделяют из многочисленных объектов окружающей среды, включая силос, почву, разлагающуюся растительность, сточные воды, влажную землю, солому и фекалии.

Низкое количество микроорганизмов часто выделяется из сырого молока, мяса, овощей, морепродуктов и объектов пищевого производства. Для выделения низкого количества L. monocytogenes используют процедуры обогащения.

Повреждённые клетки L. monocytogenes подвергаются сублетальному стрессу вследствие воздействия нагревания, замораживания или кислых условий. Для восстановления после сублетального повреждения такие клетки требуют ресусцитации в неселективной среде при температуре, способствующей восстановлению.

Listeria Selective Broth разработан по рецептуре Lovett et al. для селективного обогащения видов Listeria из молока, молочных продуктов и других пищевых продуктов. Среда рекомендована комитетом ISO с небольшой модификацией состава селективной добавки FD063I.

Функции компонентов среды:

• триптон, соевый пептон и дрожжевой экстракт обеспечивают углеродистые и азотистые соединения, длинноцепочечные аминокислоты и витамины, необходимые для метаболизма бактерий;
• декстроза является источником энергии;
• селективность среды обеспечивается добавлением селективной добавки;
• циклогексимид подавляет рост сапрофитных грибов;
• налидиксовая кислота подавляет рост грамотрицательных микроорганизмов;
• акрифлавин подавляет рост грамположительных микроорганизмов.

Акрифлавин представляет собой производное акридина с бактериостатическими свойствами в отношении многих грамположительных бактерий и слабой фунгицидной активностью.

Методика приготовления и проведения обогащения

1. Суспендируйте 36,0 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте суспензию для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте среду в автоклаве при температуре 121 °C в течение 15 мин. Давление — 15 фунтов, ориентировочно ≈0,10 МПа.
4. Охладите среду до комнатной температуры.
5. В асептических условиях добавьте восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки ANC Selective Supplement FD063 или двух флаконов селективной добавки ANC Selective Supplement FD0631 — в зависимости от выбранной схемы.
6. Тщательно перемешайте среду.
7. Разлейте подготовленную среду в стерильные пробирки или колбы в необходимом объёме.
8. Для обогащения внесите 25 г или 25 мл образца в 225 мл среды в пакете для гомогенизатора.
9. При необходимости гомогенизируйте материал.
10. Инкубируйте при 30 °C до 7 суток.
11. Пересевайте обогащённый бульон на селективный агар для листерий M567 через 1, 2 и 7 суток.

Семисуточная инкубация обеспечивает лучшее восстановление подвергшихся стрессу микроорганизмов Listeria из молока и молочных продуктов.

Тип образца

Тип образца: клинические образцы — фекалии.

Сбор и обращение с образцами

При работе с клиническими образцами применяйте соответствующие методы обращения с образцами в соответствии с установленными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Меры безопасности и ограничения

• Только для применения in vitro.
• Только для профессионального использования.
• Перед открыванием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Дополнительные требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.
• Listeria monocytogenes — высокопатогенный микроорганизм; при работе с ним необходимо соблюдать надлежащие меры предосторожности.
• Для окончательной идентификации выделенных микроорганизмов необходимы дальнейшее селективное выделение и биохимические тесты.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: однородный сыпучий порошок кремового или жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность: прозрачный раствор флуоресцентно-жёлтого цвета в пробирках.

Реакция среды

Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 3,6 % масс./об. при 25 °C.

pH: 7,3 ± 0,2.

Диапазон pH: 7,10–7,50.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления селективной добавки ANC Selective Supplement FD063 или FD0631 и инкубации при 30–35 °C в течение 24–48 ч.

• Соответствующие номера WDCM.

Ожидаемые рабочие характеристики среды обеспечиваются при применении в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Технические характеристики

Хранение и срок годности

• Храните сухую среду при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Приготовленную среду храните при температуре