Diphtheria Virulence Agar Base HiMedia M882-500G (500 г)

Питательная агаровая среда Diphtheria Virulence Agar Base HiMedia M882-500G (500 г) предназначена для определения токсигенности Corynebacterium diphtheriae и имеет конечный pH 7,8 ± 0,2. Среда применяется для анализа клинических образцов, включая мазки из зева, с выявлением линии преципитина; при возможных ложноположительных результатах требуется параллельный положительный контроль.

Назначение

Среда предназначена для определения токсигенности Corynebacterium diphtheriae.

Тип изделия: агаровая основа
Масса: 500 г
Тип образца: клинические образцы, мазок из зева

Состав

Состав рассчитан на 1 л среды:

Формула откорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 37,5 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 55–60 °C.
5. Асептически внесите в чашку Петри диаметром 100 мм 2 мл стерильного обогатителя вирулентности KL Virulence Enrichment (FD072) и 0,5 мл стерильной 1%-ной селективной добавки PTe Selective Supplement (по 1 мл во флаконе) (FD052).
6. Быстро добавьте в чашку 10 мл стерильной основы Diphtheria Virulence Agar Base.
7. До застывания среды поместите поперёк диаметра чашки полоску фильтровальной бумаги, насыщенную активным противодифтерийным антитоксином.
8. Дайте полоске погрузиться на дно чашки.
9. Инокулируйте чашку большим количеством посевного материала поперёк полоски.

Принцип измерения и интерпретация

*Corynebacterium diphtheriae* является патогенным микроорганизмом человека; патогенность связана с выработкой сильнодействующего экзотоксина, активного в отношении различных тканей, включая сердечную мышцу и периферические нервы.

Токсин, диффундирующий из штриховой культуры предполагаемого C. diphtheriae, выявляют по образованию белой линии преципитата в месте встречи с дифтерийным антитоксином, диффундирующим из полоски фильтровальной бумаги, погружённой в агар. При инкубации инокулированной чашки у токсигенных штаммов наблюдается линия преципитина.

Определение токсигенности (вирулентности) C. diphtheriae in vitro впервые было описано Элеком. Методика Элека была усовершенствована Кингом, Фробишером и Парсонсом за счёт применения стандартизированной среды. Получаемые результаты были сопоставимы с результатами испытаний методом заражения животных. Также было установлено, что протеозный пептон поддерживает выработку токсина и обеспечивает стабильность результатов.

Германн и соавторы разработали необогащённую сывороткой систему, предназначенную для устранения нерегулярности результатов, возникавшей при использовании обогащений на основе сыворотки лошади, овцы или кролика. Такие необогащённые сывороткой обогащения содержат AcicaseT™, полисорбат 80 и глицерин.

Функции компонентов среды:

• Протеозный пептон: источник углерода и азота, необходимый для хорошего роста широкого спектра микроорганизмов и выработки токсина.
• Хлорид натрия: поддерживает осмотический баланс среды.
• Агар: отверждающий компонент.
• Теллурит калия: ингибирует большинство грамотрицательных бактерий, за исключением видов Corynebacterium, Streptococcus mitis, Streptococcus salivarius и энтерококков.

Staphylococcus epidermidis может демонстрировать рост. Возможны ложноположительные результаты, поэтому положительный контроль необходимо всегда выполнять параллельно. Линию преципитации также могут образовывать Corynebacterium ulcerans и Corynebacterium pseudotuberculosis.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 24–72 ч с добавлением обогатителя вирулентности KL Virulence Enrichment (FD072) и 0,5 мл 1%-ной селективной добавки PTe Selective Supplement (по 1 мл во флаконе) (FD052).

* Соответствующие номера WDCM.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок кремового или жёлтого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется гель янтарного цвета со слабой опалесценцией.

Реакция

Реакция 3,75%-ного водного раствора по массе при 25 °C: pH 7,8 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 7,60–8,00.

Технические характеристики

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения порошка: 10–30 °C.
• Условия хранения порошка: плотно закрытая ёмкость.
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Срок использования: до даты истечения срока годности, указанной