HiMedia M870S-500G TCBS агар

Питательная селективная среда HiMedia M870S-500G TCBS агар предназначена для выделения Vibrio cholerae и других энтеропатогенных видов Vibrio. Применяется для анализа пищевых продуктов и воды; хранение продукта требуется при 10–30 °C в плотно закрытой ёмкости.

Назначение

Агар TCBS рекомендован для селективного выделения Vibrio cholerae и других энтеропатогенных видов Vibrio. Состав и эксплуатационные характеристики среды соответствуют требованиям IS:5887 (часть V), APHA, FDA BAM, ISO 21872-1:2017(E) и ISO 11133:2014.

Состав среды

Формула по ISO 21872-1:2017(E), FDA BAM, IS:5887 (часть V)

Формула TCBS

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных эксплуатационных характеристик. Эквивалент бычьей желчи — Oxgall.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 84,22 г сухой среды — эквивалентную массу обезвоженной среды на 1 л — в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Не стерилизуйте в автоклаве.
4. Охладите до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Агар TCBS первоначально разработан Nakanishi (1) и позднее модифицирован Kobayashi и соавторами (2). Среда обеспечивает быстрый рост патогенных видов Vibrio после инкубации в течение 24 ч при 37 °C, подавляя сопутствующие микроорганизмы, не относящиеся к роду Vibrio.

Современная формула рекомендована IS:5887 (часть V) (3), APHA (4), FDA-BAM (5), ISO 21872-1:2017(E) (6) и ISO 11133:2014 (7) для выделения Vibrio cholerae и Vibrio parahaemolyticus.

Образец предварительно инокулируют в щелочную пептонную воду M618S и инкубируют в течение ночи при 35 °C. Полученную культуру пересевают на агар TCBS M870S.

• Пептон и дрожжевой экстракт обеспечивают азотистые и углеродистые соединения, аминокислоты с длинной цепью, витамины группы B и другие необходимые питательные вещества.
• Желчь и цитрат натрия подавляют грамположительные бактерии (8).
• Тиосульфат натрия служит источником серы; в сочетании с цитратом железа он позволяет выявлять образование сероводорода H₂S.
• Сахароза добавлена как сбраживаемый углевод для метаболизма видов Vibrio.
• Бромтимоловый синий и тимоловый синий выполняют функцию индикаторов pH.
• Щелочной pH среды улучшает выделение Vibrio cholerae.
• Штаммы Vibrio cholerae образуют на агаре TCBS жёлтые колонии в результате сбраживания сахарозы.
• Vibrio alginolyticus также образует жёлтые колонии.
• Vibrio parahaemolyticus не сбраживает сахарозу и образует сине-зелёные колонии; такой же цвет характерен для Vibrio vulnificus.
• Отдельные изоляты видов Pseudomonas и Aeromonas также могут образовывать сине-зелёные колонии.
• В целом агар TCBS обладает высокой селективностью в отношении видов Vibrio; любая колония, не образующая H₂S, может предположительно относиться к виду Vibrio.
• При сомнительном результате принадлежность к Pseudomonas подтверждают оксидазным тестом.
• При работе с фекальными образцами среду следует инокулировать обильно, поскольку некоторые виды Vibrio быстро погибают на среде из-за сбраживания сахарозы и накопления кислот.

Тип образцов

• Пищевые образцы.
• Образцы воды.

Отбор и обращение с образцами

Для пищевых образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно руководствам (3, 5, 6, 7, 9).

Для образцов воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно руководствам и местным стандартам (4).

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать в автоклаве перед утилизацией.

Меры безопасности

• Перед открыванием ёмкости прочитайте этикетку.
• При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• При обращении с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности, установленные действующими руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. При работе с фекальными образцами среду следует инокулировать обильно, поскольку рост отдельных видов может подавляться из-за сбраживания сахарозы и накопления кислот.
2. Отдельные изоляты Pseudomonas и Aeromonas также могут образовывать на агаре TCBS сине-зелёные колонии.
3. Сбраживающие сахарозу виды Proteus могут образовывать жёлтые колонии.
4. Агар TCBS не подходит для проведения оксидазного теста видов Vibrio.
5. Некоторые штаммы V. cholerae могут образовывать на агаре TCBS зелёные или бесцветные колонии из-за замедленного сбраживания сахарозы.
6. Агар TCBS обладает высокой селективностью в отношении видов Vibrio. Любую колонию, не образующую H₂S, на агаре TCBS можно считать предположительно положительной на Vibrio.
7. Для полной идентификации необходимо выполнить дополнительные биохимические и серологические тесты.

Рабочие характеристики и оценка

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при применении в соответствии с указаниями на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от светло-жёлтого до светло-коричневого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель сине-зелёного цвета.

Реакция

Реакция водного раствора с концентрацией 8,42 % масс./об. при 25 °C:

• pH: 8,6 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 8,40–8,80.

Культуральные характеристики

Продуктивность

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.

Селективность

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.

| Организм | Посевная доза (КОЕ) | Рост | Рост | Цвет колонии | | --- | --- | --- | --- |