HiMedia M870S-100G TCBS агар

Питательная среда HiMedia M870S-100G TCBS агар производства HiMedia для селективного выделения Vibrio cholerae и других энтеропатогенных вибрионов; масса упаковки — 100 г. Применяется для анализа пищевых продуктов и воды, при этом отдельные штаммы Vibrio, Pseudomonas, Aeromonas и Proteus могут формировать сходные по цвету колонии или подавляться средой.

Назначение

TCBS агар рекомендован для селективного выделения Vibrio cholerae и других энтеропатогенных вибрионов, включая Vibrio parahaemolyticus, из образцов пищевых продуктов и воды.

Состав и критерии эффективности среды соответствуют требованиям IS:5887 (часть V), APHA, FDA BAM, ISO 21872-1:2017(E) и ISO 11133:2014.

Состав

Формула по ISO 21872-1:2017(E), FDA BAM и IS:5887 (часть V)

Формула TCBS-агара

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Жёлчь # эквивалентна Oxgall.

Принцип действия и интерпретация

TCBS агар первоначально разработан Nakanishi и позднее модифицирован Kobayashi и соавторами. Среда обеспечивает быстрый рост патогенных вибрионов после инкубации в течение 24 ч при 37 °C и подавляет сопутствующие невибрионные микроорганизмы.

Современная формула рекомендована IS:5887 (часть V), APHA, FDA BAM, ISO 21872-1:2017(E) и ISO 11133:2014 для выделения Vibrio cholerae и Vibrio parahaemolyticus.

Пептон и дрожжевой экстракт обеспечивают азотистые и углеродистые соединения, аминокислоты с длинной цепью, витамины группы B и другие необходимые для роста питательные вещества. Жёлчь и цитрат натрия подавляют грамположительные бактерии. Тиосульфат натрия служит источником серы и в сочетании с цитратом железа позволяет выявлять образование сероводорода H₂S. Сахароза добавлена как ферментируемый углевод для метаболизма вибрионов. Бромтимоловый синий и тимоловый синий выполняют функцию индикаторов pH. Щелочной pH среды повышает восстановление Vibrio cholerae.

Штаммы Vibrio cholerae образуют на TCBS агаре жёлтые колонии вследствие ферментации сахарозы. Vibrio alginolyticus также формирует жёлтые колонии. Vibrio parahaemolyticus не ферментирует сахарозу и образует сине-зелёные колонии; аналогичные колонии формирует Vibrio vulnificus. Отдельные изоляты видов Pseudomonas и Aeromonas также могут образовывать сине-зелёные колонии. В целом любая колония на TCBS агаре, не образующая H₂S, может рассматриваться как предположительно относящаяся к виду Vibrio.

При наличии сомнений принадлежность к Pseudomonas подтверждают оксидазным тестом. Образцы фекалий следует наносить на среду в большом количестве, поскольку некоторые виды Vibrio быстро отмирают на среде из-за ферментации сахарозы и накопления кислот.

Методика подготовки и посева

1. Суспендируйте 84,22 г обезвоженной среды, что соответствует эквивалентной массе на 1 л, в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Не автоклавируйте среду.
4. Охладите раствор до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте.
6. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Для анализа образцов сначала инокулируйте пробу в щелочную пептонную воду M618S и инкубируйте в течение ночи при 35 °C. Полученную культуру пересейте на TCBS агар M870S.

Тип образцов

• Образцы пищевых продуктов.
• Образцы воды.

Отбор и обращение с образцами

Для пищевых продуктов применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов согласно руководствам IS:5887 (часть V), FDA BAM, ISO 21872-1:2017(E), ISO 11133:2014 и другим применимым руководствам.

Для образцов воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов согласно руководствам APHA, локальным стандартам и установленным лабораторным процедурам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Меры предосторожности

• Перед открыванием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте надлежащие правила работы в микробиологической лаборатории при обращении с образцами и культурами.
• При обращении с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности согласно установленным руководствам.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения

1. Среду следует инокулировать большим количеством фекального материала, поскольку рост некоторых видов может подавляться из-за ферментации сахарозы и накопления кислот.
2. Отдельные изоляты Pseudomonas и Aeromonas также могут формировать на TCBS агаре сине-зелёные колонии.
3. Ферментирующие сахарозу виды Proteus могут образовывать жёлтые колонии.
4. TCBS агар не подходит для проведения оксидазного теста у видов Vibrio.
5. Некоторые штаммы Vibrio cholerae могут иметь зелёную или бесцветную окраску на TCBS агаре из-за замедленной ферментации сахарозы.
6. TCBS агар обладает высокой селективностью в отношении видов Vibrio. Любая колония на TCBS агаре, не образующая H₂S, может рассматриваться как предположительно положительная на Vibrio.
7. Для полной идентификации необходимо выполнить дополнительные биохимические и серологические тесты.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от светло-жёлтого до светло-коричневого цвета.

Желирование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель сине-зелёного цвета.

Реакция

Реакция водного раствора с массовой концентрацией 8,42 % при 25 °C.

• pH: 8,6 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 8,40–8,80.

Культуральные характеристики

Продуктивность

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.

Селективность

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Ожидаемые рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании согласно инструкции на этикетке, в пределах срока годности и при хранении в рекомендованных условиях.

Технические характеристики