Железосодержащий сульфитный агар HiMedia M868-500G (уп/500 гр)

Диагностическая питательная среда Железосодержащий сульфитный агар HiMedia M868-500G (уп/500 гр) для выявления термофильных анаэробных микроорганизмов, вызывающих сульфидную порчу пищевых продуктов. Железосодержащий сульфитный агар применяют при инкубации посевов при 55–56 °C в течение 24–48 ч, а почернение колоний рассматривают как предварительный признак роста клостридий, требующий подтверждающих биохимических исследований.

Назначение

Среда предназначена для определения термофильных анаэробных микроорганизмов, вызывающих сульфидную порчу пищевых продуктов.

• Тип питательной среды: диагностическая
• Назначение изделия: агар
• Тип образца: пищевые продукты
• Регистрационные сведения: ФСЗ 2009/03705
• Соответствие: ГОСТ Р 54354-2011

Состав

Формула рассчитана и стандартизирована для обеспечения заявленных характеристик эффективности.

Принцип действия и интерпретация результатов

Железосодержащий сульфитный агар представляет собой модификацию сульфитного агара Камерона, разработанного Национальной ассоциацией консервной промышленности США. Было показано, что концентрация сульфита 0,1 % в исходной формуле подавляла рост некоторых штаммов Clostridium sporogenes. Позднее это наблюдение было подтверждено; установлено, что концентрация сульфита 0,05 % не подавляет исследуемые микроорганизмы.

Большинство клостридий содержит сульфитредуктазу в цитоплазме, но не выделяет этот фермент наружу. При образовании H₂S из сульфита формируется тёмная окраска колонии вследствие образования осадка сульфида железа из соли железа и цитрата.

Триптон обеспечивает микроорганизмы азотом и другими питательными веществами, необходимыми для роста. Сульфитредуцирующие бактерии обычно образуют чёрные колонии в результате восстановления сульфита до сульфида, который реагирует с солью железа(III).

Почернение среды или колоний является только предположительным свидетельством роста клостридий. Для идентификации выросших микроорганизмов необходимо провести подтверждающие тесты. Многие грамотрицательные бактерии способны восстанавливать сульфит с образованием сульфида железа, однако в их случае ферменты являются внеклеточными, поэтому вся среда темнеет и подсчёт отдельных колоний становится невозможным.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 26 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Методики выявления микроорганизмов

Метод глубинного посева с перемешиванием

1. Разлейте среду порциями по 10 мл в пробирки.
2. Внесите образец, когда температура среды составляет приблизительно 50 °C.
3. Дайте среде застыть.
4. Инкубируйте при 55 °C в течение 24–48 ч.
5. Оцените наличие характерных чёрных сферических колоний в толще среды.

Типичный термофильный вид Desulfotomaculum nigrificans образует в толще среды отчётливые чёрные сферические колонии.

Метод Аттенборо и Скарра

1. Разбавленные образцы сахара или другого пищевого продукта профильтруйте через мембранные фильтры.
2. Сверните фильтры и поместите их в пробирки, содержащие достаточное количество железосодержащего сульфитного агара при температуре 50 °C для полного покрытия фильтров.
3. Дайте среде застыть.
4. Инкубируйте при 55–56 °C в течение 24–48 ч.
5. После инкубации подсчитайте количество чёрных колоний на мембранном фильтре.
6. Проведите подтверждающие тесты для идентификации микроорганизма, выросшего в среде.

Мембранно-фильтрационная методика сокращает время анализа, обеспечивает сопоставимую точность и позволяет исследовать образцы большего объёма.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют в анаэробных условиях после инкубации при 55–56 °C в течение 24–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или коричневато-жёлтый однородный сыпучий порошок.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется жёлтый слегка опалесцирующий гель.

Реакция среды

• Условия определения: водный раствор с концентрацией 2,6 % по массе к объёму при 25 °C
• pH: 7,1 ± 0,2

Диапазон pH

pH: 6,90–7,30.

Технические характеристики

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для пищевых образцов применяйте соответствующие методы отбора и подготовки проб согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

• Среда является средой общего назначения и может не поддерживать рост требовательных микроорганизмов.
• Для подтверждения результатов необходимо выполнить дополнительные биохимические тесты.
• Почернение колоний или среды не является достаточным основанием для окончательной идентификации клостридий.
• При восстановлении сульфита некоторыми грамотрицательными бактериями происходит потемнение всей среды из-за внеклеточного расположения ферментов; в таком случае подсчёт отдельных колоний невозможен.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C
• Условия хранения сухого продукта: плотно закрытая ёмкость
• Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке
• Дополнительные условия: хранить в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения
• После вскрытия: плотно закрыть контейнер и хранить продукт в сухом состоянии
• После каждого использования: плотно герметизировать контейнер

Продукт обладает гигроскопичностью. При ненадлежащем хранении возможно образование комков. Рабочие характеристики среды сохраняются при использовании в течение установленного срока годности и соблюдении условий, указанных на этикетке.

Меры безопасности

Перед открыванием контейнера прочитайте этикетку. При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.

Соблюдайте правила безопасной работы в микробиологической лаборатории и стандартные меры предосторожности, установленные для обращения с образцами и культурами. Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты необходимо утилизировать безопасным способом с применением автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов соблюдайте утверждённые лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с образцами, должны быть обеззаражены и утилизированы в соответствии с действующими методиками лабораторной работы.