HiMedia M868-100G Железо-сульфитный агар

Питательная агаровая среда HiMedia M868-100G «Железо-сульфитный агар» производства HiMedia для выявления термофильных анаэробных микроорганизмов, вызывающих сульфидную порчу пищевых продуктов. Железо-сульфитный агар обеспечивает визуальное выявление сульфитредуцирующих бактерий по образованию чёрных колоний при инкубации в анаэробных условиях при 55–56 °C в течение 24–48 ч.

Назначение

Железо-сульфитный агар предназначен для выявления термофильных анаэробных микроорганизмов, вызывающих сульфидную порчу пищевых продуктов.

Тип образца: пищевые продукты.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности.

Принцип измерения и интерпретация

Железо-сульфитный агар представляет собой модификацию сульфитного агара Кэмерона, разработанного Национальной ассоциацией консервной промышленности США. Было показано, что концентрация сульфита 0,1 % в исходной формуле подавляет рост некоторых штаммов Clostridium sporogenes. Впоследствии установлено, что концентрация сульфита 0,05 % не подавляет рост исследуемых микроорганизмов.

Большинство клостридий имеют сульфитредуктазу в цитоплазме, но не способны выводить этот фермент наружу. При образовании H₂S из сульфита колония темнеет вследствие формирования осадка сульфида железа из цитрата.

Триптон обеспечивает микроорганизмы азотом и другими питательными веществами, необходимыми для бактериального роста. Сульфитредуцирующие бактерии обычно образуют чёрные колонии в результате восстановления сульфита до сульфида, который реагирует с солью железа (III).

Почернение среды является только предварительным признаком роста клостридий. Для идентификации выросшего микроорганизма необходимо провести подтверждающие биохимические тесты.

Некоторые грамотрицательные бактерии также способны восстанавливать сульфит с образованием сульфида железа. В этих случаях ферменты являются внеклеточными, поэтому темнеет весь объём среды, что делает количественный подсчёт микроорганизмов невозможным.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 26 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Методики выявления сульфидной порчи

Метод посева в толщу среды с перемешиванием

1. Разлейте среду порциями по 10 мл в пробирки.
2. Внесите образец, когда температура среды составляет приблизительно 50 °C.
3. Дайте среде застыть.
4. Инкубируйте при 55 °C в течение 24–48 ч.

Типичный термофильный вид Desulfotomaculum nigrificans образует отчётливые чёрные сферические колонии в толще среды.

Метод Аттенборо и Скарра

1. Разбавленные образцы сахара или другого пищевого продукта профильтруйте через мембранные фильтры.
2. Сверните фильтры и поместите их в пробирки, содержащие минимальное количество железо-сульфитного агара при температуре 50 °C, достаточное для покрытия фильтра.
3. Дайте среде застыть.
4. Инкубируйте при 55–56 °C в течение 24–48 ч.
5. После инкубации подсчитайте количество чёрных колоний на мембранном фильтре.
6. Для идентификации микроорганизмов, выросших в среде, проведите подтверждающие тесты.

Мембранно-фильтрационная методика сокращает время анализа, обеспечивает сопоставимую точность и позволяет исследовать большие объёмы образца.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют в анаэробных условиях после инкубации при 55–56 °C в течение 24–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: от светло-жёлтого до коричневато-жёлтого однородного сыпучего порошка без комков.

Гелеобразование

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с гелем 1,5 % агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется жёлтый слегка опалесцирующий гель.

Реакция

Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 2,6 % масс./об. при 25 °C.

pH: 7,1 ± 0,2.

Диапазон pH

Диапазон pH: 6,90–7,30.

Технические характеристики

• Тип продукта: стандартный
• Назначение изделия: агар
• Форма выпуска: порошок
• Масса: 100 г
• Происхождение: животное
• Тип упаковки: ПНД (полиэтилен высокой плотности)
• Конечный pH приготовленной среды при 25 °C: 7,1 ± 0,2
• Концентрация среды для приготовления: 26 г/1000 мл
• Температура стерилизации: 121 °C
• Время стерилизации: 15 мин
• Давление при автоклавировании: 15 фунтов (≈0,103 МПа)
• Температура внесения образца для метода посева в толщу среды: приблизительно 50 °C
• Температура инкубации для метода посева в толщу среды: 55 °C
• Температура инкубации для метода Аттенборо и Скарра: 55–56 °C
• Время инкубации: 24–48 ч
• Условия инкубации: анаэробные

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для пищевых образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухой среды: 10–30 °C
• Условия хранения сухой среды: плотно закрытый контейнер
• Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C
• Условия хранения: сухое проветриваемое помещение, защищённое от экстремальных температур и источников воспламенения
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке

После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом месте. Гигроскопичность среды может привести к образованию комков. Неправильное хранение также может вызвать комкование порошка. После каждого использования контейнер следует герметично закрывать. Рабочие характеристики продукта сохраняются при использовании в течение установленного срока годности и при соблюдении рекомендованной температуры хранения.

Ограничения применения

• Среда является средой общего назначения и может не поддерживать рост требовательных микроорганизмов.
• Для подтверждения результатов необходимо выполнить дополнительные биохимические тесты.
• Почернение среды или образование чёрных колоний не является достаточным основанием для окончательной идентификации клостридий.
• При росте некоторых грамотрицательных бактерий возможно почернение всего объёма среды из-за внеклеточного восстановления сульфита; в таком случае количественный подсчёт микроорганизмов невозможен.

Ожидаемые характеристики

Рабочие характеристики среды ожидаются при приготовлении и применении в соответствии с инструкцией на этикетке, а также при использовании продукта в пределах срока годности и хранении при рекомендованной температуре.

Меры безопасности

Перед открытием контейнера прочитайте этикетку.

При работе с образцами и культурами используйте:

• защитные перчатки;
• защитную одежду;
• средства защиты глаз;
• средства защиты лица.

Соблюдайте правила надлежащей микробиологической работы при обращении с образцами и культурами. При работе необходимо соблюдать стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами. Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов посредством автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов необходимо соблюдать утверждённые лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с образцами, должны быть обеззаражены и утилизированы в соответствии с действующими лабораторными методиками.