HiMedia M868-100G Железо-сульфитный агар

Сухая питательная среда HiMedia M868-100G Железо-сульфитный агар для обнаружения термофильных анаэробных организмов, вызывающих сульфидную порчу пищевых продуктов. Применяется для анализа проб пищевой продукции; вес упаковки составляет 100 г.

Принцип измерения

Железо-сульфитный агар является модификацией агара Кэмерона, разработанной Национальной ассоциацией консервщиков США. Большинство клостридий обладают сульфитредуктазой в цитоплазме, но не способны выводить её наружу. При восстановлении сульфита до H₂S в присутствии цитрата железа (III) образуется осадок сульфида железа, что приводит к окрашиванию колоний в чёрный цвет.

Триптон обеспечивает азотом и другими питательными веществами, необходимыми для роста бактерий. Сульфитредуцирующие бактерии обычно образуют чёрные колонии в результате восстановления сульфита до сульфида, который реагирует с солью железа (III).

Методика проведения анализа

Подготовка среды

1. Растворить 26 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление ≈0,1 МПа) в течение 15 минут.
4. Охладить до 45–50 °C, тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри.

Методы определения организмов, вызывающих сульфидную порчу

Метод глубокого посева (Deep-Shake Culture Method)

1. Разлить среду в пробирки по 10 мл.
2. Внести пробу, когда среда остынет примерно до 50 °C.
3. Дать среде застыть и инкубировать при 55 °C в течение 24–48 часов.
4. Типичные термофильные виды, такие как Desulfotomaculum nigrificans, образуют отчетливые чёрные сферические колонии в толще среды.

Метод Аттенборо и Скарра (Attenborough and Scarr Method)

1. Разбавленные пробы сахара или других пищевых продуктов профильтровать через мембранные фильтры.
2. Свернуть фильтры и поместить в пробирки, содержащие достаточное количество железо-сульфитного агара (при температуре 50 °C), чтобы полностью покрыть фильтр.
3. Дать среде застыть и инкубировать при 55–56 °C в течение 24–48 часов.
4. После инкубации подсчитать количество чёрных колоний на мембранном фильтре.

Важное примечание: Почернение среды является лишь предварительным доказательством роста клостридий. Для окончательной идентификации необходимо провести подтверждающие биохимические тесты. Некоторые грамотрицательные бактерии также способны восстанавливать сульфит с образованием сульфида железа, однако в этих случаях ферменты являются внеклеточными, и вся среда становится тёмной, что делает подсчёт колоний невозможным.

Технические характеристики

Состав, г/л:

Общие параметры:

Контроль качества

• Внешний вид: однородный свободнотекучий порошок от светло-жёлтого до коричневато-жёлтого цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,5% агаром.
• Цвет и прозрачность готовой среды: жёлтый, слегка опалесцирующий гель в чашках Петри.
• Реакция: pH 2,6% (масс./об.) водного раствора при 25 °C составляет 7,1 ± 0,2.
• Диапазон pH: 6,90–7,30.

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются в анаэробных условиях после инкубации при 55–56 °C в течение 24–48 часов.

Область применения и ограничения

• Тип образцов: пробы пищевых продуктов.
• Ограничения: среда общего назначения и может не поддерживать рост требовательных (fastidious) организмов.
• Требования: для подтверждения результатов необходимо проведение дополнительных биохимических тестов.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников возгорания.
• Хранение готовой среды: при температуре 20–30 °C.
• Особенности: из-за гигроскопичности продукта после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание образования комков.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты должны быть утилизированы путём автоклавирования и/или сжигания в соответствии с установленными лабораторными процедурами по обращению с инфекционными материалами.