Агар для определения остаточных количеств пенициллина в молоке HiMedia M849-500G (уп/500 гр)

Питательная агаризованная среда Агар для определения остаточных количеств пенициллина в молоке HiMedia M849-500G (уп/500 гр) предназначена для быстрого качественного выявления следовых количеств пенициллина в молоке. Применяется с суспензией Bacillus stearothermophilus и формирует зоны ингибирования при наличии ингибирующих веществ в диапазоне pH 7,60–8,00.

Назначение и область применения

Среда PM Indicator Agar (Penicillin in Milk Indicator Agar) предназначена для качественного скринингового определения остаточных количеств пенициллина и других ингибирующих веществ в молоке дисковым методом. Методика предусматривает последующее подтверждающее исследование для установления, относится ли выявленный ингибитор к β-лактамным остаткам.

Среда используется с бактериями Bacillus stearothermophilus, чувствительными к пенициллину и β-лактамным остаткам. В соответствии с описанной методикой среда поддерживает рост бактерий и образование кислоты, что позволяет регистрировать зоны ингибирования вокруг контрольных и исследуемых дисков.

Метод является модификацией метода, одобренного Международной молочной федерацией для качественного определения пенициллина в молоке. Для определения следовых количеств пенициллина применяется качественный дисковый метод, рекомендованный AOAC.

Состав

Расход сухой среды: 3,2 г на 100 мл дистиллированной воды.

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности среды.

Принцип измерения и интерпретация

PM Indicator Agar применяется для быстрого выявления следовых количеств пенициллина в молоке с использованием качественных дисков с Bacillus stearothermophilus. Среда рассчитана на рост и образование кислоты B. stearothermophilus, чувствительной к пенициллину и β-лактамным остаткам.

Изначально для выявления пенициллина в молоке с использованием Bacillus subtilis применялась среда под названием «восстановительная среда» (Reductase Medium). Описанная среда предназначена для более быстрого и воспроизводимого выявления ингибирующих веществ по сравнению с этой исходной методикой.

При наличии пенициллина или другого ингибитора рост бактерий вокруг соответствующего диска подавляется, что проявляется прозрачной зоной ингибирования на поверхности агара. Диаметр зоны сопоставляют с зонами вокруг положительного, отрицательного и холостого контрольных дисков.

Подготовка среды

1. Суспендируйте 3,2 г сухой среды в 100 мл дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения, чтобы полностью растворить среду.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов силы на квадратный дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в необходимом объёме.

Методика проведения скринингового анализа

1. Засейте подготовленную среду 1 мл равномерно диспергированной суспензии B. stearothermophilus, приготовленной в соответствии с методикой AOAC.
2. Приготовьте разведения стандартного пенициллина G для получения концентраций от 0,005 до 0,1 единицы/мл; раствор используют как положительный контроль.
3. Для отрицательного контроля используйте суспензию обезжиренного сухого молока, не содержащего ингибиторов.
4. Разместите на поверхности агара холостой контрольный диск, диск отрицательного контроля и диск положительного контроля.
5. Переверните чашку и инкубируйте до формирования вокруг диска положительного контроля зон ингибирования диаметром 17–20 мм.
6. Оцените исследуемый образец по наличию и диаметру зоны ингибирования относительно контрольных дисков.

Интерпретация скринингового анализа

Методика проведения подтверждающего анализа

1. Инактивируйте образец молока нагреванием при 82 °C в течение 2 мин.
2. Быстро охладите образец до комнатной температуры.
3. Переверните чашку.
4. Инкубируйте чашку в условиях, использованных для скринингового анализа.
5. Сопоставьте зоны вокруг диска с инактивированным исследуемым образцом, диска положительного контроля и диска с инактивированным молоком.

Интерпретация подтверждающего анализа