Основа агара для Clostridium perfringens HiMedia M837I (уп/500 гр)

Основа агара для Clostridium perfringens HiMedia M837I (уп/500 г) — селективная питательная среда для предварительной идентификации и подсчета Clostridium perfringens в пищевых продуктах и кормах. Состав и критерии эффективности среды соответствуют спецификациям стандарта ISO 7937:2004; сертификат ФСЗ 2009/03709, соответствует ГОСТ Р 54354-2011.

Принцип измерения

Среда основана на рецептуре триптозе-сульфит-циклосеринового агара (TSC). Триптоза, соевый пептон и дрожжевой экстракт обеспечивают азот- и углеродсодержащие соединения, длинноцепочечные аминокислоты, витамины группы B и микроэлементы, необходимые для роста клостридий. Метабисульфит натрия и цитрат аммония железа(III) служат индикаторами восстановления сульфита, что проявляется в виде образования колоний чёрного цвета. D-циклосерин (добавка FD014) обеспечивает селективность, подавляя рост сопутствующей микрофлоры, в частности факультативных анаэробов.

Методика проведения анализа

Приготовление среды

1. Суспендировать 21,0 г порошка в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.
4. Охладить до 45–50 °C.
5. Добавить регидратированное содержимое одного флакона селективной добавки T.S.C. (FD014). При необходимости флуоресцентного детектирования добавить селективную добавку CMF (FD243).
6. Тщательно перемешать перед разливом в стерильные чашки Петри.

Посев и инкубация

1. В чашку Петри, в которой поддерживается температура 44–47 °C на водяной бане, налить 10–15 мл агара TSC и аккуратно перемешать с инокулятом вращательными движениями.
2. После застывания нанести поверхностный слой из 10 мл того же агара TSC.
3. Поместить чашки в контейнеры с модифицированной атмосферой или другие подходящие устройства для создания анаэробных условий.
4. Инкубировать при 37 °C в течение 20 $\pm$ 2 ч. Слишком длительная инкубация может привести к избыточному почернению среды.

Подсчёт и отбор колоний

1. Выбирают чашки, содержащие менее 150 колоний (желательно из последовательных разведений).
2. Подсчитывают характерные колонии предполагаемых C. perfringens.
3. Пять характерных колоний отбирают для биохимического подтверждения.

Биохимическое подтверждение

Метод I: с использованием лактозо-сульфитного бульона (M1287)

1. Инокуляция: Каждую отобранную колонию переносят в среду с жидким тиогликолятом (M009). Инкубируют в анаэробиостате при 37 °C в течение 18–24 ч.
2. Перенос: 5 капель культуры из тиогликолята переносят в лактозо-сульфитный бульон (M1287). Инкубируют аэробно при 46 °C на водяной бане в течение 18–24 ч.
3. Интерпретация: Положительный результат — наличие газа (заполнение трубки Дюрана более чем на 1/4) и чёрного осадка (сульфит железа). При сомнениях проводят повторный перенос 5 капель в новую пробирку M1287 с инкубацией при 46 °C.

Метод II: с использованием буферизированной нитрат-подвижной среды (M6301) и лактозо-желатиновой среды (M9871)

1. Нитрат-подвижная среда: Кошнюю колонию вносят уколом в деаэрированную среду M6301. Инкубируют анаэробно при 37 °C в течение 24 ч.
   • Подвижность определяется по диффузному росту от линии укола.
   • Проверяют восстановление нитрата в нитрит: добавляют 0,2–0,5 мл реагента для обнаружения нитрита. Появление красного цвета подтверждает реакцию. Если цвет не появился за 15 мин, добавляют немного цинковой пыли; появление красного цвета после этого означает, что восстановление нитрата не произошло.
2. Лактозо-желатиновая среда: Колонию вносят в деаэрированную среду M9871. Инкубируют анаэробно при 37 °C в течение 24 ч.
   • Оценивают наличие газа и жёлтого окрашивания (ферментация лактозы).
   • Охлаждают пробирки при 5 °C в течение 1 ч для проверки разжижения желатина. Если среда осталась твердой, инкубируют еще 24 ч.

Итоговая интерпретация: C. perfringens характеризуются образованием чёрных колоний на TSC, отсутствием подвижности, восстановлением нитрата до нитрита, образованием кислоты и газа из лактозы, а также разжижением желатина за 48 ч.

Технические характеристики

Состав (ISO Specification — Perfringens Agar Base T.S.C.)

Состав (Perfringens Agar Base T.S.C. M837I)

Селективные добавки (после автоклавирования)

T.S.C. Selective Supplement (FD014):

• D-циклосерин: 200 мг (в 2 флаконах).

Общие параметры

• Происхождение компонентов: животные
• Тип продукта: регулярный
• Физическая форма: порошок
• Тип упаковки: ПНД (HDPE)
• Внешний вид: светло-жёлтый или коричневато-жёлтый однородный свободно текущий порошок
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,5 % раствором агара
• Реакция 4,2 % водного раствора при 25 °C: pH 7,6 $\pm$ 0,2
• Диапазон pH: 7,40–7,80

Культуральные характеристики

Характеристики определены в анаэробной атмосфере с добавлением селективной добавки T.S.C. (FD014) после инкубации при 37 $\pm$ 1 °C в течение 20 $\pm$ 4 – 44 $\pm$ 4 ч.

Область применения и ограничения

Применяется для анализа пищевых продуктов и кормов для животных. Ограничения:

• Индивидуальные организмы могут иметь вариативные паттерны роста.
• Для некоторых образцов может потребоваться предварительное обогащение в среде с вареным мясом (M149).

Условия эксплуатации и хранения

• Хранить закрытый контейнер при температуре 10–30 °C.
• Готовую среду хранить при температуре 2–8 °C.
• Из-за гигроскопичности продукта после вскрытия плотно закрывать флакон для предотвращения комкования.
• Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Комплект поставки и совместимость

По заявке поставляются следующие добавки:

• FD013 Добавка с канамицином и полимиксином (S.F.P. Supplement)
• FD014 Добавка с циклосерином (S.F.P. Supplement)
• FD045 Эмульсия яичного желтка (100 мл)