Основа агара для Clostridium perfringens HiMedia M837I (уп/500 гр)

Питательная среда — основа агара для Clostridium perfringens HiMedia M837I (уп/500 гр), производство HiMedia, в порошкообразной форме. Основа предназначена для количественного определения Clostridium perfringens в пищевых продуктах с использованием селективных и обогащающих добавок; рабочий pH приготовленной среды составляет 7,6 ± 0,2 при 25 °C.

Назначение

Основа агара HiMedia M837I предназначена для приготовления среды для выявления и количественного определения Clostridium perfringens в пищевых продуктах и кормах для животных.

С селективными и обогащающими добавками среду используют для предварительной идентификации и подсчёта Clostridium perfringens. Состав и критерии эффективности среды соответствуют требованиям ISO 7937:2004. В российской карточке указаны регистрационное удостоверение ФСЗ 2009/03709 и соответствие ГОСТ Р 54354-2011.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Модель: M837I
• Назначение изделия: основа питательной среды
• Форма выпуска: порошок
• Тип продукта: стандартный
• Тип упаковки: ПНД (HDPE)
• Происхождение: животное
• Регистрационное удостоверение: ФСЗ 2009/03709
• Рабочая концентрация при приготовлении: 21,0 г на 500 мл очищенной или дистиллированной воды
• Конечный pH при 25 °C: 7,6 ± 0,2
• Диапазон pH по контролю качества: 7,40–7,80
• Условия хранения сухого продукта: 10…30 °C, в плотно закрытой ёмкости
• Условия хранения приготовленной среды: 2…8 °C

Состав среды

Основа агара для Clostridium perfringens по ISO — T.S.C.

Основа агара для Clostridium perfringens T.S.C. M8371

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности.

Триптоза эквивалентна ферментативному гидролизату белка. Соевый пептон эквивалентен ферментативному гидролизату сои.

Добавка после автоклавирования

Селективная добавка T.S.C.

Для приготовления среды используется FD014 — 2 флакона.

Дополнительные компоненты

По заявке поставляются:

• FD013 — S.F.P. Supplement, добавка для Clostridium perfringens с канамицином и полимиксином.
• FD014 — S.F.P. Supplement, добавка для Clostridium perfringens с циклосерином.
• FD045 — Egg Yolk Emulsion, эмульсия яичного желтка, 100 мл во флаконе.
• CMF Selective Supplement (FD243) — селективная добавка для флуорогенного обнаружения.

Приготовление среды

1. Взвесьте 21,0 г порошка и суспендируйте в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм, что соответствует приблизительно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 минут.
4. Охладите среду до 45…50 °C.
5. Добавьте восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки T.S.C. (FD014). Для флуорогенного обнаружения допускается альтернативное добавление восстановленного содержимого флакона селективной добавки CMF (FD243).
6. Тщательно перемешайте среду и разлейте в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Триптозо-сульфит-циклосериновый агар (TSC) предназначен для количественного выделения Clostridium perfringens из пищевых продуктов. Триптоза, соевый пептон и дрожжевой экстракт обеспечивают азотистые и углеродистые соединения, аминокислоты с длинной цепью, витамины группы B и микроэлементы, необходимые для роста клостридий.

Метабисульфит натрия и цитрат аммония и железа(III) служат индикаторами восстановления сульфита: результат реакции проявляется образованием колоний чёрного цвета. D-циклосерин, содержащийся в добавке FD014, подавляет сопутствующую микрофлору и обеспечивает селективное выделение Clostridium perfringens.

Гомогенизированные образцы пищевых продуктов можно непосредственно высевать на поверхность чашек либо предварительно обогащать в среде для варёного мяса (Cooked Meat Medium, M149), а затем высевать на поверхность агара.

Образцы

• Тип образца: пищевые продукты и корма для животных.

Обработка образцов и посев

1. Внесите в чашку 10–15 мл T.S.C.-агара, поддерживаемого на водяной бане при 44…47 °C.
2. Смешайте среду с инокулятом, осторожно вращая чашку.
3. После затвердевания среды нанесите сверху дополнительный слой из 10 мл того же T.S.C.-агара.
4. Оставьте верхний слой до затвердевания.
5. Поместите чашки в герметичные банки с модифицированной атмосферой или другие подходящие контейнеры.
6. Инкубируйте в анаэробных условиях при 37 °C в течение 20 ± 2 ч.

Более длительная инкубация может привести к чрезмерному почернению чашек.

Подсчёт и отбор колоний

1. По завершении установленного периода инкубации отберите все чашки, содержащие менее 150 колоний.
2. По возможности выберите чашки, соответствующие последовательным разведениям.
3. На каждой чашке подсчитайте характерные колонии предполагаемого Clostridium perfringens.
4. Отберите пять характерных колоний и подтвердите их принадлежность одним из методов биохимического подтверждения.

Биохимическое подтверждение

Метод I: подтверждение с использованием основы лактозо-сульфитного бульона M1287

Инокуляция и инкубация

1. Инокулируйте каждую отобранную колонию в жидкую тиогликолевую среду (Fluid Thioglycollate Medium, M009).
2. Инкубируйте в анаэробных условиях при 37 °C в течение 18–24 ч.
3. После инкубации без задержки перенесите стерильной пипеткой 5 капель тиогликолевой культуры в основу лактозо-сульфитного бульона M1287.
4. Инкубируйте в аэробных условиях на водяной бане при 46 °C в течение 18–24 ч.

Интерпретация результатов

Осмотрите пробирки с основой лактозо-сульфитного бульона M1287 на наличие газа и чёрного окрашивания, обусловленного образованием осадка сульфита железа. Результат считают положительным, если газ заполняет более четверти трубки Дюрхема и в пробирке образовался чёрный осадок.

При сомнительном результате, если трубка Дюрхема в почерневшей среде заполнена газом менее чем на четверть, без задержки перенесите стерильной пипеткой 5 капель предыдущей культуры в другую пробирку с основой лактозо-сульфитного бульона M1287. Инкубируйте на водяной бане при 46 °C в течение 18–24 ч и осмотрите пробирку описанным выше способом.

Бактерии, образующие характерные колонии в среде T.S.C., считают Clostridium perfringens. Во всех остальных случаях результат считают отрицательным.

Метод II: подтверждение с использованием буферной среды для определения подвижности и восстановления нитратов M6301

Инокуляция и считывание результатов в среде для определения подвижности и восстановления нитратов

1. Выполните посев уколом каждой отобранной колонии в свежедегазированную буферную среду для определения подвижности и восстановления нитратов M6301.
2. Инкубируйте в анаэробных условиях