HiMedia M837I-500G Основа агара для Perfringens

Основа агара для Clostridium perfringens HiMedia M837I-500G — сухая питательная среда, предназначенная для количественного определения Clostridium perfringens в пищевых продуктах. Состав и показатели эффективности среды соответствуют требованиям стандарта ISO 7937:2004.

Принцип измерения

Среда основана на рецептуре агара триптоза-сульфита-циклосерина (TSC). Триптоза, соевый пептон и экстракт дрожжей обеспечивают азот- и углеродсодержащие соединения, длинноцепочечные аминокислоты, витамины группы B и микроэлементы, необходимые для роста клостридий. Метабисульфит натрия и цитрат железа(III) аммония служат индикаторами восстановления сульфита, что проявляется в виде образования колоний чёрного цвета. D-циклосерин (добавляется отдельно) обеспечивает селективность, подавляя рост сопутствующей микрофлоры, в частности факультативных анаэробов.

Область применения

Среда используется для анализа:

• пищевых продуктов;
• кормов для животных.

Гомогенизированные пробы можно высевать непосредственно на поверхность поверхности агара или предварительно обогащать в среде с вареным мясом (Cooked Meat Medium, M149).

Методика проведения анализа

Приготовление среды

1. Суспендируйте 21,0 г порошка в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx 0,1$ МПа) в течение 15 минут.
4. Охладите до 45–50 °C и добавьте содержимое одной ампулы селективной добавки T.S.C. (FD014). Примечание: если требуется флуоресцентное детектирование, используйте селективную добавку CMF (FD243).
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Посев и инкубация

1. В чашку Петри, в которой агар поддерживается при температуре 44–47 °C на водяной бане, влейте 10–15 мл среды.
2. Аккуратно перемешайте среду с инокулятом, медленно вращая чашку.
3. После застывания нанесите поверхный слой из 10 мл того же агара T.S.C.
4. После окончательного застывания поместите чашки в специализированные контейнеры с модифицированной атмосферой.
5. Инкубируйте в анаэробных условиях при 37 °C в течение 20 ч $\pm$ 2 ч. Внимание: избыточная продолжительность инкубации может привести к чрезмерному почернению среды.

Подсчёт и отбор колоний

1. Выберите чашки, содержащие менее 150 колоний (по возможности из последовательных разведений).
2. Подсчитайте характерные колонии предполагаемых C. perfringens.
3. Для подтверждения выберите пять характерных колоний и проведите биохимический анализ.

Биохимическое подтверждение

Метод I: с использованием лактозно-сульфитного бульона (M1287)

1. Инокуляция: Перенесите каждую выбранную колонию в среду Fluid Thioglycollate Medium (M009). Инкубируйте в анаэробных условиях при 37 °C в течение 18–24 ч.
2. Перенос: С помощью стерильной пипетки перенесите 5 капель культуры в лактозно-сульфитный бульон (M1287).
3. Инкубация: Инкубируйте в аэробных условиях при 46 °C на водяной бане в течение 18–24 ч.
4. Интерпретация: Положительным результатом считается наличие чёрного осадка (сульфит железа) и заполнение трубки Дюрана газом более чем на 1/4. При сомнениях перенесите 5 капель культуры в новую пробирку M1287 и повторите инкубацию.

Метод II: с использованием буферизированной нитратно-подвижной среды (M6301)

1. Подвижность и нитраты: Выполните укольный посев колонии в деаэрированную среду M6301. Инкубируйте в анаэробных условиях при 37 °C 24 ч. Подвижность определяется по диффузному росту от линии укола.
2. Тест на нитриты: Добавьте 0,2–0,5 мл реагента для обнаружения нитритов. Появление красного цвета подтверждает восстановление нитрата до нитрита. Если цвет не появился в течение 15 мин, добавьте немного цинковой пыли; появление красного цвета после этого означает, что восстановление нитрата не произошло.
3. Лактозно-желатиновая среда (M9871): Посейте колонию в деаэрированную среду M9871. Инкубируйте в анаэробных условиях при 37 °C 24 ч. Оцените наличие газа и жёлтого окрашивания (ферментация лактозы). Охладите пробирку при 5 °C в течение 1 ч для проверки разжижения желатина. Если среда осталась твердой, повторно инкубируйте 24 ч.

Итоговая интерпретация: Бактерии, образующие чёрные колонии на T.S.C., неподвижные, восстанавливающие нитрат до нитрита, производящие кислоту и газ из лактозы и разжижающие желатин за 48 ч, считаются C. perfringens.

Технические характеристики

Состав (ISO Specification — основа агара Perfringens)

Состав (M837I)

Селективные добавки (после автоклавирования)

T.S.C. Selective Supplement (FD014):

• Состав: D-циклосерин, 200 мг.
• Формат: 2 флакона.

Общие параметры

• Происхождение компонентов: животное
• Тип продукта: стандартный
• Физическая форма: порошок
• Материал упаковки: ПНД (HDPE)
• Внешний вид: гомогенный свободно текущий порошок от светло-жёлтого до коричневато-жёлтого цвета
• Желирование: плотное, сопоставимо с 1,5% агаром
• pH (4,2% водный раствор при 25 °C): 7,6 $\pm$ 0,2 (диапазон 7,40–7,80)

Культуральные характеристики

Инкубация в анаэробной атмосфере с добавлением селективной добавки T.S.C. (FD014) при 37 $\pm$ 1 °C в течение 20 $\pm$ 4 – 44 $\pm$ 4 ч.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения порошка: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения готовой среды: 2–8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия плотно закрывать флакон для предотвращения комкования. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Ограничения и предостережения

• Различные штаммы микроорганизмов могут демонстрировать разный характер роста на данной среде.
• Рекомендуется валидация среды для конкретных микроорганизмов, не указанных в сертификате анализа (COA).
• В некоторых случаях может потребоваться предварительное обогащение пробы.
• При работе с образцами и культурами соблюдайте стандартные правила микробиологической безопасности, используйте средства индивидуальной защиты (перчатки, очки, защитная одежда).