HiMedia M837I-500G Основа агара для Perfringens

Основа питательной среды HiMedia M837I-500G Основа агара для Perfringens — порошковый компонент массой 500 г для приготовления агара Tryptose Sulphite Cycloserine (T.S.C.) по техническим требованиям ISO 7937:2004. Основа предназначена для количественного определения Clostridium perfringens в пищевых продуктах и кормах для животных с селективной добавкой D-циклосерина.

Назначение

Основа агара HiMedia M837I-500G предназначена для приготовления среды Tryptose Sulphite Cycloserine (T.S.C.) для количественного определения Clostridium perfringens в пищевых продуктах. Тип образца: пищевые продукты и корма для животных.

Состав и критерии эффективности среды соответствуют требованиям ISO 7937:2004.

Состав среды

Основа агара Perfringens по спецификации ISO — T.S.C.

Содержание компонентов указано в г/л.

Основа агара Perfringens T.S.C. M8371

Содержание компонентов указано в г/л.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности.

Обозначения:

• # Триптоза эквивалентна ферментативному гидролизату белка.
• ## Соевый пептон эквивалентен ферментативному гидролизату сои.

Селективные добавки

Добавки вносят после автоклавирования.

Селективная добавка T.S.C.

Селективная добавка FD014: 2 флакона.

При необходимости флуорогенного выявления вместо T.S.C. Selective Supplement (FD014) можно использовать селективную добавку CMF (FD243).

Приготовление среды

1. Суспендируйте 21,0 г основы в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм, что соответствует примерно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Добавьте восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки T.S.C. (FD014). Если требуется флуорогенное выявление, добавьте восстановленное содержимое флакона селективной добавки CMF (FD243).
6. Тщательно перемешайте среду перед разливом в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Триптозо-сульфит-циклосериновый агар (T.S.C.) первоначально разработан для количественного определения C. perfringens в пищевых продуктах. Среда T.S.C. предназначена для количественного выделения C. perfringens при подавлении роста других факультативных анаэробов.

Перечень компонентов и их функции:

• Триптоза, соевый пептон и дрожжевой экстракт обеспечивают азотистые и углеродистые соединения, аминокислоты с длинной цепью, витамины группы B и микроэлементы, необходимые для роста клостридий.
• Метабисульфит натрия и цитрат аммония и железа(III) служат индикаторами восстановления сульфита; реакция проявляется образованием колоний чёрного цвета.
• D-циклосерин (FD014) обеспечивает селективное выделение C. perfringens за счёт подавления сопутствующей микрофлоры.

Гомогенизированные пищевые образцы можно непосредственно высевать штриховым методом на поверхность чашек либо предварительно обогащать в мясной варёной среде (M149) перед нанесением на чашки.

Обработка образцов и культивирование

Посев и инкубация на среде T.S.C.

1. Налейте в чашку 10–15 мл агара T.S.C., выдержанного на водяной бане при 44–47 °C.
2. Добавьте инокулят и тщательно перемешайте, осторожно вращая чашку.
3. После застывания среды нанесите верхний слой из 10 мл того же агара.
4. Дайте верхнему слою застыть.
5. Поместите чашки в герметичные сосуды с модифицированной атмосферой или другие подходящие контейнеры.
6. Инкубируйте в анаэробных условиях при 37 °C в течение 20 ч ± 2 ч.

Более длительная инкубация может привести к чрезмерному почернению чашек.

Подсчёт и отбор колоний

1. По завершении установленного периода инкубации отберите все чашки, содержащие менее 150 колоний.
2. По возможности выберите чашки, соответствующие последовательным разведениям.
3. На каждой чашке подсчитайте характерные колонии предположительно относящиеся к C. perfringens.
4. Отберите пять характерных колоний и подтвердите их одним из методов биохимического подтверждения.

Биохимическое подтверждение

Метод I. Подтверждение с использованием основы лактозно-сульфитного бульона M1287

Инокуляция и инкубация

1. Инокулируйте каждую отобранную колонию в жидкую тиогликолевую среду (M009).
2. Инкубируйте в анаэробных условиях при 37 °C в течение 18–24 ч.
3. После инкубации без задержки перенесите стерильной пипеткой 5 капель тиогликолевой культуры в основу лактозно-сульфитного бульона (M1287).
4. Инкубируйте аэробно на водяной бане при 46 °C в течение 18–24 ч.

Интерпретация результата

Исследуйте пробирки с основой лактозно-сульфитного бульона (M1287) на образование газа и появление чёрной окраски, обусловленной осадком сульфита железа.

Пробирки считают положительными при наличии одновременно следующих признаков:

• пробирка Дарема заполнена газом более чем на одну четверть;
• присутствует чёрный осадок.

Если результат вызывает сомнение и пробирка Дарема в почерневшей среде заполнена газом менее чем на одну четверть:

1. Без задержки перенесите стерильной пипеткой 5 капель предыдущей культуры в другую пробирку с основой лактозно-сульфитного бульона (M1287).
2. Инкубируйте на водяной бане при 46 °C в течение 18–24 ч.
3. Исследуйте пробирку описанным выше способом.

Бактерии, образующие характерные колонии на среде T.S.C., считают C. perfringens. Во всех остальных случаях результат считают отрицательным.

Метод II. Подтверждение с использованием буферной среды для определения подвижности и восстановления нитрата M6301

Инокуляция и оценка среды для определения подвижности и восстановления нитрата

1. Уколом инокулируйте каждую отобранную колонию в свежедегазированную буферную среду для определения подвижности и восстановления нитрата (M6301).
2. Инкубируйте в анаэробных условиях при 37 °C в течение 24 ч. 3