Питательная среда HiMedia M837I-100G Основа агара для Perfringens — порошковая основа агара для микробиологического анализа, предназначенная для работы при температуре хранения 10–30 °C. Применяется для количественного определения Clostridium perfringens в пищевых продуктах и кормах для животных; масса упаковки составляет 100 г.

Назначение

Основа агара предназначена для количественного определения Clostridium perfringens в пищевых продуктах в соответствии с методикой ISO 7937:2004. Среда также применяется для анализа кормов для животных.

Состав

Основа агара для Perfringens по спецификации ISO — T.S.C.

Основа агара для Perfringens T.S.C. M8371

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Триптоза эквивалентна ферментативному гидролизату белка.

Соевый пептон эквивалентен ферментативному гидролизату сои.

Добавка после автоклавирования

Селективная добавка T.S.C.

Селективная добавка FD014: 2 флакона.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 21,0 г порошка в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте среду автоклавированием при давлении 15 фунтов (ориентировочно 0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Добавьте восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки T.S.C. FD014.
6. При необходимости флуорогенного выявления вместо FD014 добавьте восстановленное содержимое селективной добавки CMF FD243.
7. Тщательно перемешайте среду перед разливом в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Триптозно-сульфит-циклосериновый агар (T.S.C.) разработан для количественного определения Clostridium perfringens в пищевых продуктах. Среда обеспечивает количественное восстановление C. perfringens при подавлении роста других факультативных анаэробов.

Триптоза, соевый пептон и дрожжевой экстракт обеспечивают микроорганизмы азотистыми и углеродистыми соединениями, аминокислотами с длинной углеродной цепью, витаминами группы B и микроэлементами, необходимыми для роста клостридий.

Метабисульфит натрия и цитрат аммонийного железа служат индикаторной системой восстановления сульфита: образование чёрных колоний указывает на восстановление сульфита.

D-циклосерин из селективной добавки FD014 подавляет сопутствующую микрофлору и способствует селективному выделению C. perfringens.

Гомогенизированные образцы пищевых продуктов можно непосредственно наносить штрихом на поверхность чашек либо предварительно обогащать в среде Cooked Meat Medium M149 перед нанесением штриха.

Среда также рекомендована Американской ассоциацией общественного здравоохранения (APHA) и комитетом ISO для количественного определения C. perfringens в пищевых продуктах.

Тип образца

• Пищевые продукты.
• Корма для животных.

Отбор и обработка образцов

Посев и инкубация

1. Налейте в чашку 10–15 мл T.S.C.-агара, выдержанного на водяной бане при 44–47 °C.
2. Добавьте инокулят и тщательно перемешайте, осторожно вращая чашку.
3. После затвердевания среды нанесите верхний слой из 10 мл того же T.S.C.-агара.
4. Дайте верхнему слою затвердеть.
5. Поместите чашки в контейнеры с модифицированной атмосферой или другие подходящие ёмкости.
6. Инкубируйте в анаэробных условиях при 37 °C в течение 20 ч ± 2 ч.

Более длительная инкубация может привести к чрезмерному почернению чашек.

Подсчёт и отбор колоний

1. По завершении установленного периода инкубации отберите все чашки, содержащие менее 150 колоний.
2. По возможности выберите среди них чашки, соответствующие последовательным разведениям.
3. На каждой чашке подсчитайте характерные колонии предположительно C. perfringens.
4. Отберите пять характерных колоний.
5. Подтвердите принадлежность колоний одним из методов биохимического подтверждения.

Биохимическое подтверждение

Метод I. Подтверждение с использованием основы лактозно-сульфитного бульона M1287

Посев и инкубация

1. Внесите каждую отобранную колонию в жидкую тиогликолевую среду M009.
2. Инкубируйте в анаэробных условиях при 37 °C в течение 18–24 ч.
3. Сразу после инкубации стерильной пипеткой перенесите 5 капель тиогликолевой культуры в основу лактозно-сульфитного бульона M1287.
4. Инкубируйте аэробно на водяной бане при 46 °C в течение 18–24 ч.

Интерпретация результатов

Исследуйте пробирки с основой лактозно-сульфитного бульона M1287 на образование газа и появление чёрной окраски, обусловленной осадком сульфита железа.

Результат считают положительным, если трубка Дюрхема заполнена газом более чем на одну четверть и в пробирке присутствует чёрный осадок.

При сомнительном результате, когда трубка Дюрхема в почерневшей среде заполнена газом менее чем на одну четверть, выполните повторное исследование:

1. Сразу перенесите стерильной пипеткой 5 капель предыдущей культуры в другую пробирку с основой лактозно-сульфитного бульона M1287.
2. Инкубируйте пробирку на водяной бане при 46 °C в течение 18–24 ч.
3. Исследуйте пробирку по описанной выше процедуре.

Бактерии, образующие характерные колонии на T.S.C.-среде, считают C. perfringens. Во всех остальных случаях результат считают отрицательным.

Метод II. Подтверждение с использованием буферной среды для определения подвижности и восстановления нитрата M6301

Посев и считывание результатов

1. Выполните посев каждой отобранной колонии уколом в свежедегазированную буферную среду для определения подвижности и восстановления нитрата M6301.
2. Инкубируйте в анаэробных условиях при 37 °C в течение 24 ч.
3. Оцените тип роста вдоль линии посева.
4. Подвижность определяют по диффузному распространению роста в среду от линии посева.
5. Для определения нитрита добавьте в каждую пробирку с