HiMedia M836-100G Основа агара для Clostridium difficile

Основа питательной среды HiMedia M836-100G Основа агара для Clostridium difficile — порошкообразный компонент животного происхождения с конечным pH 7,4 ± 0,2. Применяется для селективного выделения Clostridium difficile из пищевых продуктов и отдельных патологических образцов при анаэробной инкубации.

Назначение

Основа агара для селективного выделения Clostridium difficile из пищевых образцов и некоторых патологических материалов. Клинический тип образца — кал; для пищевых образцов применяют соответствующие процедуры отбора и обработки проб.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Принцип действия и интерпретация результатов

Спектр заболеваний, вызываемых Clostridium difficile — патогенным представителем рода Clostridium, поражающим кишечник, — включает псевдомембранозный колит, антибиотикоассоциированный колит, хронические воспалительные заболевания кишечника, послеоперационную диарею и диарею, не связанную с применением антибиотиков.

Среда содержит фруктозу и используется с яичным желтком для выделения C. difficile из фекальных образцов. Селективность обеспечивается добавлением D-циклосерина и цефокситина. Эти селективные агенты подавляют рост большинства представителей семейства Enterobacteriaceae, а также Enterococcus faecalis, стафилококков, грамотрицательных анаэробных бацилл и видов Clostridium, отличных от C. difficile, которые могут присутствовать в фекальных образцах в большом количестве.

Нейтральный красный индикатор, присутствовавший в исходной рецептуре, в состав среды не входит, поскольку среда предназначена для применения с кровью овцы или лошади. Состав основы обеспечивает обильный рост C. difficile. Добавление 7 % (об./об.) дефибринированной крови лошади повышает выделение C. difficile и увеличивает размер колоний.

Для первичного выделения C. difficile часть фекального образца распределяют по поверхности среды для получения изолированных колоний. После 48 ч инкубации C. difficile образует серовато-белые, неправильной формы, приподнятые и непрозрачные колонии диаметром 4–6 мм.

Типичная морфология C. difficile при окраске по Граму может не выявляться в колониях, полученных на этой среде, из-за присутствия антибиотиков. Для получения характерной морфологии выполняют пересев на кровяной агар M073.

Колонии C. difficile на этой среде не демонстрируют типичных флуоресценции и окраски, тогда как другие клостридии могут давать флуоресценцию. Для полной идентификации и подтверждения проводят дополнительные исследования:

• окраску по Граму;
• оценку морфологии;
• биохимические тесты;
• исследование специфического цитотоксина;
• клиническое наблюдение.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 34,55 г порошка в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Осторожно нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите приготовленную основу до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте регидратированное содержимое одного флакона селективной добавки CC Selective Supplement I (FD010).
6. Добавьте 7 % (об./об.) дефибринированной крови лошади или овцы.
7. Тщательно перемешайте.
8. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Методика посева и инкубации

1. Нанесите часть фекального образца на поверхность приготовленной среды для получения изолированных колоний.
2. Инкубируйте чашки в анаэробных условиях при 37 °C в течение 18–48 ч.
3. При необходимости выполните пересев характерных колоний на кровяной агар M073.
4. Для окончательной идентификации проведите окраску по Граму, морфологические, биохимические и другие подтверждающие исследования, включая определение специфического цитотоксина и оценку клинических данных.

Типы образцов и обращение с ними

Клинические образцы

Используют образцы кала. Отбор и обращение с клиническими образцами проводят подходящими методами в соответствии с установленными лабораторными процедурами.

Пищевые образцы

Отбор и обработку пищевых образцов проводят подходящими методами в соответствии с установленными процедурами для пищевых продуктов.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием до утилизации.

Ограничения применения

Для дальнейшей идентификации необходимо выполнить дополнительные биохимические и серологические исследования.

Технические характеристики

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Базовая среда: прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.
• После добавления 7 % (об./об.) дефибринированной крови лошади: в чашках Петри образуется непрозрачный гель вишнёво-красного цвета.

Реакция среды

Реакция 6,91 % (м/о) водного раствора при 25 °C: pH 7,4 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 7,20–7,60.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют в анаэробных условиях после добавления селективной добавки CC Selective Supplement I (FD010) и 7 % (об./об.) дефибринированной крови лошади, после инкубации при 35–37 °C в течение 48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C.
• Упаковка: плотно закрытая ёмкость.
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Срок использования: до даты, указанной на этикетке.
• После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом виде для предотвращения образования комков из-за гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Хранить в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После каждого использования ёмкость необходимо плотно закрывать.