HiMedia M836-100G Основа агара для Clostridium difficile

Основа агара для Clostridium difficile HiMedia M836-100G (производство: HiMedia) предназначена для селективного выделения Clostridium difficile из пищевых продуктов и патологических образцов. Среда обеспечивает обильный рост целевого микроорганизма при подавлении большинства представителей Enterobacteriaceae, Enterococcus faecalis, стафилококков и других видов клостридий.

Принцип измерения

Среда разработана для первичного выделения C. difficile (патогена, вызывающего псевдомембранозный колит и антибиотик-ассоциированный колит) из фекальных проб. Селективность достигается за счет добавления антибиотиков D-циклосерина и цефокситина, которые ингибируют рост сопутствующей флоры. В данной модификации основы отсутствует индикатор нейтральный красный, так как среда предназначена для использования с кровью лошадей или овец. Добавление 7 % (об/об) крови лошадей увеличивает степень восстановления C. difficile и размер образующихся колоний.

Методика проведения анализа

Приготовление среды

1. Растворить 34,55 г порошка в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Осторожно нагреть до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут.
4. Охладить до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавить содержимое одного флакона селективной добавки CC Selective Supplement I (FD010) и 7 % (об/об) дефибринированной крови лошадей или овец.
6. Тщательно перемешать и разлить по стерильным чашкам Петри.

Процедура посева и инкубации

1. Часть фекального образца распределить по поверхности среды для получения изолированных колоний.
2. Инкубировать чашки в анаэробных условиях при температуре 37 °C в течение 18–48 часов.

Интерпретация результатов

Через 48 часов C. difficile образует серовато-белые, неправильные, выпуклые и непрозрачные колонии диаметром 4–6 мм. Важно: из-за наличия антибиотиков в среде типичная морфология при окраске по Грамму в колониях может отсутствовать. Для подтверждения характеристик рекомендуется пересев на кровяной агар (M073). Колонии C. difficile на данной среде не проявляют типичной флуоресценции и окраски, характерной для других клостридий. Окончательная идентификация требует проведения биохимических тестов, анализа на специфические цитотоксины и клинических наблюдений.

Технические характеристики

Состав (г/л)

Общие параметры

• Происхождение компонентов: животное
• Тип продукта: регулярный
• Физическая форма: порошок
• Материал упаковки: ПНД (HDPE)
• Вес: 100 г
• Назначение: основа среды

Контроль качества

Внешний вид и свойства

• Внешний вид: однородный свободно текучий порошок от кремового до желтого цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,5 % агаром.
• Цвет и прозрачность:
  • Базовая среда: светло-янтарный прозрачный или слегка опалесцирующий гель.
  • После добавления 7 % крови лошадей: вишнево-красный непрозрачный гель.
• Реакция: pH 7,4 $\pm$ 0,2 (для 6,91 % водного раствора при 25 °C).
• Диапазон pH: 7,20–7,60.

Культуральные характеристики

Результаты получены в анаэробных условиях с добавлением селективной добавки CC Selective Supplement I (FD010) и 7 % дефибринированной крови лошадей после инкубации при 35–37 °C в течение 48 часов.

Область применения и требования к образцам

• Типы образцов: клинические образцы (фекалии), образцы пищевых продуктов.
• Обращение с образцами: сбор и транспортировка должны осуществляться в соответствии с установленными руководствами по работе с клиническими и пищевыми пробами.
• Ограничения: для окончательной идентификации штамма необходимо проведение дополнительных биохимических и серологических тестов.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C в сухом вентилируемом месте, защищенном от источников возгорания и экстремальных температур.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание образования комков.
• Утилизация: загрязненные материалы и использованные среды должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации перед утилизацией.

Меры предосторожности

Продукт предназначен для диагностики in vitro и профессионального использования. При работе с образцами и культурами необходимо использовать средства индивидуальной защиты (перчатки, защитная одежда, средства защиты глаз и лица) и соблюдать правила микробиологической безопасности.