Основа кровяного агара № 2 HiMedia M834A-500G (уп/500 гр)

Сухая основа питательной среды для кровяного агара № 2 HiMedia M834A-500G (уп/500 гр) с содержанием агара 1,2 % предназначена для приготовления кровяного агара. Среда применяется для максимального выделения прихотливых патогенных микроорганизмов после добавления крови без влияния на гемолитические реакции; источник крови влияет на характер выявляемого гемолиза.

Назначение

Основа кровяного агара № 2 предназначена для приготовления обогащённой среды после добавления стерильной дефибринированной крови. Среда рекомендована для максимального выделения прихотливых патогенных микроорганизмов без искажения их гемолитических реакций.

Среда применяется для:

• исследования клинического материала: мочи, фекалий и гноя;
• анализа пищевых образцов;
• приготовления шоколадного агара для выделения Haemophilus и Neisseria;
• первичного выделения Haemophilus при использовании лошадиной крови для обогащения;
• дифференциации Brucella и Campylobacter при добавлении соответствующих антибиотических селективных добавок.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заявленных рабочих характеристик.

# Эквивалент экстракта печени.

Методика приготовления

1. Суспендируйте 19,75 г порошка в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа; ≈1,03 бар) при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте стерильную дефибринированную кровь в концентрации 7 % об./об.
6. Для получения однородной среды тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Селективные добавки

Для Brucella:

• добавьте восстановленное содержимое 1 флакона селективной добавки NPBCVN (FD005) к 500 мл стерильной расплавленной основы.

Для Campylobacter:

• добавьте восстановленное содержимое 1 флакона одной из следующих добавок к 500 мл стерильной расплавленной основы:
  • селективная добавка Blaser–Wang (FD006);
  • селективная добавка Butzler (FD007);
  • селективная добавка Skirrow (FD008);
  • минеральная ростовая добавка (FD009).

Для Streptococcus:

• добавьте восстановленное содержимое 1 флакона селективной добавки NNP (FD031) к 500 мл стерильной расплавленной основы;
• тщательно перемешайте;
• разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Прихотливый микроорганизм характеризуется полными, сложными пищевыми потребностями и требует дополнительных молекул — структурных компонентов клетки — для выживания и роста.

Среда обладает высокой питательной ценностью. Микроорганизмы, продуцирующие гемолизины, образуют на среде видимые зоны гемолиза.

После добавления различных антибиотических добавок среда может использоваться как дифференциальная для Brucella и Campylobacter. Культуры Brucella обладают высокой инфекционностью и требуют осторожного обращения.

Инкубацию предпочтительно проводить в атмосфере, содержащей 5–10 % углекислого газа.

Сравнительные исследования с использованием крови лошади, кролика и овцы показали, что овечья кровь обеспечивает наиболее чёткие и воспроизводимые характеристики колоний и гемолиза после 24 и 48 ч инкубации.

Среда также применяется:

• для приготовления шоколадного агара при выделении Haemophilus и Neisseria;
• для первичного выделения Haemophilus при использовании лошадиной крови в качестве обогащающей добавки.

При первичном выделении Haemophilus лучшие результаты получают, если половину чашки с лошадино-кровяным агаром распределённо обрабатывают двумя каплями 10%-ного сапонина.

Функции компонентов

• Экстракт HL и дрожжевой экстракт усиливают рост и гемолитические реакции прихотливых микроорганизмов, включая стрептококки и пневмококки.
• Протеозный пептон служит источником азота.
• Экстракт HL и дрожжевой экстракт обеспечивают микроорганизмы необходимыми источниками углерода, витаминов, азота и аминокислот.
• Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие.
• Добавление крови в концентрации 5–10 % обеспечивает дополнительные факторы роста и используется для определения гемолитических реакций.
• Характер гемолиза может изменяться в зависимости от источника животной крови и типа использованной основы.

Требования к образцам

Тип образца

• Клинический материал: моча, фекалии, гной.
• Пищевые образцы.

Сбор и обращение с образцами

Для клинических образцов используйте соответствующие методы обращения с материалом согласно установленным лабораторным рекомендациям.

Для пищевых образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно действующим рекомендациям.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

• Для выявления гемолиза рекомендуется добавлять овечью кровь. Среда не поддерживает рост H. haemolyticus.
• Добавление лошадиной или кроличьей крови к основе поддерживает рост H. haemolyticus, однако характеристики таких культур могут напоминать β-гемолитические стрептококки; результат необходимо подтверждать дополнительными методами.
• Характер гемолиза зависит от источника использованной крови.

Контроль качества

Внешний вид

Порошок от кремового до жёлтого цвета, однородный, свободно сыпучий.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с гелем, содержащим 1,2 % агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Базовая среда: прозрачный гель светло-янтарного цвета, от прозрачного до слегка опалесцирующего.
• После добавления 5 % об./об. стерильной дефибринированной крови: в чашках Петри образуется непрозрачный гель вишнёво-красного цвета.

Реакция

Реакция 4,0%-ного раствора в воде при 25 °C: pH 7,4 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 7,20–7,60.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления 5 % об./об. стерильной дефибринированной крови и инкубации при 35–37 °C в течение 18–48 ч.

| Организм | Посевная доза (КОЕ) | Рост без крови | Восстановление без крови | Рост с кровью | Восстановление с кровью | Гемолиз | | --- | --- |