HiMedia M834-100G Основа кровяного агара №2

Основа кровяного агара №2 HiMedia M834-100G — высокопитательная сухая среда для приготовления питательных сред с добавлением крови. Используется для максимального восстановления стрептококков, пневмококков и других требовательных к питанию патогенных микроорганизмов без подавления их гемолитических реакций.

Принцип измерения и интерпретация

Среда предназначена для культивирования привередливых (fastidious) организмов, которые имеют полные потребности в питании и нуждаются в дополнительных молекулах-строительных блоках для выживания. Основа кровяного агара №2 является высокопитательной:

• Источники питания: протеоз-пептон служит источником азота; экстракт HML (эквивалент экстракта печени) и дрожжевой экстракт обеспечивают необходимые углеводы, витамины, азот и аминокислоты.
• Осмотический баланс: поддерживается за счет добавления хлорида натрия.
• Гемолиз: добавление крови (5–10 %) обеспечивает дополнительные факторы роста и служит основой для определения гемолитических реакций. Микроорганизмы, вырабатывающие гемолизин, создают видимые зоны гемолиза на поверхности среды.

Среда также может использоваться как дифференциальная для видов Brucella и Campylobacter при добавлении соответствующих антибиотиков. Кроме того, на её основе готовится шоколадный агар для изоляции видов Haemophilus и Neisseria.

Область применения

Применяется для первичного выделения микроорганизмов из следующих типов образцов:

• Клинический материал: моча, фекалии.
• Образцы пищевых продуктов.

Методика приготовления и использования

Приготовление базовой среды

1. Суспендируйте 21,25 г порошка в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$ 0,1 МПа) в течение 15 минут.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Асептически добавьте 7 % (об/об) стерильной дефибринированной крови.

Подготовка селективных вариантов

Для получения селективных сред добавьте в 500 мл стерильной расплавленной основы содержимое одной регидратированной ампулы соответствующей добавки:

• Для видов Brucella: селективная добавка NPBCVN (FD005).
• Для видов Campylobacter: селективная добавка Blaser-Wang (FD006), Butzler (FD007), Skirrow (FD008) или Minerals Growth Supplement (FD009).
• Для видов Streptococcus: селективная добавка NNP (FD031).

После добавления тщательно перемешайте и разлейте по стерильным чашкам Петри.

Технические характеристики

Состав, г/л:

Общие параметры

Контроль качества

• Внешний вид: однородный свободно текучий порошок от кремового до желтого цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,5 % раствором агара.
• Цвет и прозрачность:
  • Базовая среда: светло-янтарный прозрачный или слегка опалесцирующий гель.
  • После добавления 5 % стерильной дефибринированной крови: непрозрачный гель вишнево-красного цвета.
• Реакция: pH 4,0 % (масса/объем) водного раствора при 25 °C составляет 7,4 $\pm$ 0,2.
• Диапазон pH: 7,20–7,60.

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются при использовании 5 % (масса/объем) стерильной дефибринированной крови после инкубации при 35–37 °C в течение 18–48 часов.

Ограничения и предостережения

• Для обнаружения гемолиза рекомендуется использовать кровь овцы (дает наиболее четкие и надежные характеристики колоний и гемолиза через 24 и 48 часов инкубации).
• Среда не поддерживает рост H. haemolyticus при использовании крови овцы.
• Использование лошадиной или кроличьей крови поддерживает рост H. haemolyticus, однако их колонии напоминают бета-гемолитические стрептококки, что требует дополнительного подтверждения.
• Характер гемолиза может варьироваться в зависимости от источника крови и типа базовой среды.
• Культуры Brucella высокоинфекционны; работа с ними должна проводиться с особой осторожностью, предпочтительно в атмосфере с 5–10 % CO₂.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре +10…+30 °C в сухом проветриваемом месте, защищенном от источников возгорания и экстремальных температур. Из-за гигроскопичности продукта после вскрытия флакон необходимо плотно закрывать во избежание комкования.
• Хранение готовой среды: при температуре +2…+8 °C.
• Утилизация: загрязненные материалы и использованные среды должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации перед утилизацией.