HiMedia M833-100G Основа агара для Bacillus cereus

Порошкообразная основа питательной среды HiMedia M833-100G Основа агара для Bacillus cereus, масса 100 г, предназначенная для приготовления селективной среды. Применяется для выделения и количественного определения Bacillus cereus в пищевых, молочных и клинических образцах при хранении продукта при 10–30 °C; Bacillus cereus на этой среде неотличим от Bacillus thuringiensis без подтверждающих тестов.

Назначение

Основа агара HiMedia M833-100G рекомендована для приготовления селективной питательной среды для выделения и количественного определения Bacillus cereus из:

• пищевых образцов;
• молочных образцов;
• клинических образцов, включая материал из абсцессов и ран.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Назначение изделия: основа
• Масса: 100 г
• Температура хранения продукта: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C
• Конечный pH: 7,2 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,00–7,40

Приготовление среды

1. Взвесьте 20,5 г порошка и суспендируйте в 475 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/дюйм² (примерно 0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Асептически добавьте восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки PolyB (FD003) и 25 мл стерильной эмульсии яичного желтка (FD045).
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Пищевое отравление, вызываемое Bacillus cereus, связано с употреблением заражённого риса. Микроорганизм также вызывает глазные инфекции и широкий спектр других клинических состояний, включая образование абсцессов, менингит, септицемию и инфицирование ран. Bacillus cereus является причиной мастита у животных, особенно у овец и тёлок.

Агар для Bacillus cereus, разработанный Холбруком и Андерсоном, представляет собой селективную среду для выделения и количественного определения Bacillus cereus из пищевых продуктов. Среда поддерживает рост даже небольшого количества клеток и спор Bacillus cereus при наличии большого количества других загрязняющих микроорганизмов пищевого происхождения.

Типичные колонии Bacillus cereus имеют:

• зубчатые края;
• диаметр около 5 мм;
• характерную окраску от бирюзовой до павлинье-синей;
• выраженную преципитацию яичного желтка того же цвета вокруг колоний.

Бактерии не ферментируют маннитол, поэтому вокруг колоний отсутствует изменение цвета индикаторного красителя. Бромтимоловый синий используется как индикатор pH для выявления ферментации маннитола.

Добавление сульфата полимиксина B до конечной концентрации 100 ЕД/мл среды придаёт среде селективность для выделения Bacillus cereus и подавляет рост сопутствующей бактериальной флоры. При подозрении на наличие плесневых грибов в посевном материале для подавления плесневой контаминации можно добавить фильтр-стерилизованный циклоheксимид в концентрации 40 мкг/мл.

Некоторые штаммы Bacillus cereus дают очень слабую реакцию на яичный желток. Кроме того, на этой среде Bacillus cereus неотличим от Bacillus thuringiensis.

Пептон обеспечивает питательные свойства среды, а пируват натрия улучшает преципитацию яичного желтка и усиливает спорообразование.

Методика выделения и количественного определения

Для выделения и количественного определения Bacillus cereus в пищевых продуктах рекомендуется следующая методика:

1. Гомогенизируйте образец и разведите его в пептонной воде M028.
2. Нанесите 0,1 мл разведённого гомогенизированного образца на поверхность приготовленной среды.
3. Инкубируйте при 37 °C в аэробных условиях в течение 24–48 ч.
4. Для существенного снижения возможного роста контаминирующей микрофлоры используйте инкубацию в течение 24 ч.
5. Представьте результат как количество колоний Bacillus cereus на 1 г пищевого образца.
6. До интерпретации результатов выполните подтверждающие тесты.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления селективной добавки PolyB (FD003) и эмульсии яичного желтка (FD045), после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

• Proteus hauseri ранее был известен как Proteus vulgaris.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от кремового до зеленовато-жёлтого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Базовая среда: прозрачный или слегка опалесцирующий гель зелёного цвета.
• После добавления эмульсии яичного желтка: в чашках Петри образуется непрозрачный гель желтовато-зелёного цвета.

Реакция

Реакция 4,1%-ного водного раствора базовой среды при 25 °C:

• pH: 7,2 ± 0,2;
• диапазон pH: 7,00–7,40.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для пищевых и молочных образцов используйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным методическим указаниям.

Для клинических образцов используйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным методическим указаниям.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения метода

• Bacillus cereus и Bacillus thuringiensis имеют идентичные характеристики, поэтому их идентификация затруднена.
• И