HiMedia M813I-500G Буферный агар с активированным углем и дрожжевым экстрактом

Питательная агаризованная среда HiMedia M813I-500G Буферный агар с активированным углем и дрожжевым экстрактом — порошок массой 500 г для селективного выделения и культивирования видов Legionella из проб воды. Среда применяется в санитарно-бактериологических и микробиологических лабораториях; температура хранения продукта составляет 10–30 °C.

Назначение

Среда рекомендована для селективного выделения и культивирования видов Legionella из градирен, всех типов проб воды и других материалов.

Состав и критерии эффективности среды соответствуют требованиям ISO 11731-1:2017 и ISO 11731-2:2017.

Состав среды

BCYE-агар по ISO 11731

Количество компонентов указано в г/л.

BCYE-агар M8131

Селективные варианты среды

BCYE+AB с селективной добавкой

BCYE+GVPC с селективной добавкой

Агар Modified Widomski Yee (MWY)

Методика приготовления

1. Суспендируйте 35,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Добавьте 2,4 г гранул KOH и перемешайте до растворения.
3. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
4. Стерилизуйте автоклавированием при температуре (121 ± 3) °C в течение (15 ± 1) мин.
5. Охладите среду до 45–51 °C.
6. В асептических условиях добавьте стерильное регидратированное содержимое двух флаконов добавки для роста Legionella без SS, сдвоенная упаковка FD041A: части A и B.
7. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри. Во время разливания постоянно перемешивайте среду, чтобы частицы активированного угля распределялись равномерно.

Примечание: согласно стандарту рекомендуется использовать 2,8 г гранул гидроксида калия.

Приготовление вариантов среды

BCYE-агар без L-цистеина (BCYE-cys)

Приготовьте среду по составу BCYE-агара и в асептических условиях добавьте содержимое двух флаконов добавки для роста Legionella без SS, сдвоенная упаковка FD041A, используя только часть B.

BCYE+AB с селективной добавкой

В асептических условиях добавьте регидратированное содержимое одного флакона добавки PCP FD347.

BCYE+GVPC с селективной добавкой

В асептических условиях добавьте регидратированное содержимое двух флаконов селективной добавки GVPC FD143.

Агар Modified Widomski Yee (MWY)

В асептических условиях добавьте регидратированное содержимое одного флакона селективной добавки MWY FD040 на 100 мл среды.

Принцип действия и интерпретация

Агар с угольно-дрожжевым экстрактом CYE первоначально разработан Feeley и соавторами как модификация среды F-G. В состав среды F-G входили крахмал и триптон; эти компоненты были заменены на активированный уголь и дрожжевой экстракт соответственно, что обеспечило лучшее восстановление Legionella pneumophila. Позднее было установлено, что добавление буфера ACES к угольно-дрожжевой среде улучшает её рабочие характеристики. Дополнительное введение α-кетоглутарата повысило чувствительность среды.

Состав основы буферного агара с угольно-дрожжевым экстрактом соответствует требованиям ISO 11731-2. Виды Legionella — неспорообразующие узкие грамотрицательные палочки. Legionella вызывает пневмонию, включая болезнь легионеров, либо лёгкое лихорадочное заболевание, известное как лихорадка Понтиак. В обычных питательных средах виды Legionella не окисляют и не ферментируют углеводы, а также не растут на кровяном агаре с овечьей кровью. На буферном агаре с угольно-дрожжевым экстрактом рост происходит лучше и быстрее.

Основными источниками энергии для Legionella служат аминокислоты. L-цистин является необходимым компонентом, играющим важную роль в метаболизме роста Legionella. L-цистин и пирофосфат железа способствуют росту Legionella.

Функции компонентов среды:

• активированный уголь действует как детоксикант;
• дрожжевой экстракт служит богатым источником витаминов, азота и углерода;
• буфер ACES поддерживает оптимальный pH для роста;
• L-цистеина гидрохлорид, пирофосфат железа и α-кетоглутарат стимулируют рост видов Legionella;
• антибиотические добавки подавляют контаминирующие микроорганизмы при селективном выделении.

Для селективного выделения могут применяться следующие добавки:

• PCP FD347 содержит полимиксин B, цефазолин натрия и пимарицин;
• селективная добавка GVPC FD143 для Legionella содержит глицин, полимиксина B