Основа забуференного угольного агара с дрожжевым экстрактом HiMedia M813-500G (уп/500 гр)

Компонент питательной среды Основа забуференного угольного агара с дрожжевым экстрактом HiMedia M813-500G (уп/500 гр) предназначен для селективного выделения и культивирования видов Legionella. Основа используется для анализа клинических, водных и других образцов после добавления селективных и ростовых добавок, а приготовленная среда требует стерилизации автоклавированием.

Назначение и область применения

Основа предназначена для приготовления селективной питательной среды для выделения и культивирования видов Legionella.

• Рекомендуемое назначение: селективное выделение и культивирование видов Legionella.
• Типы образцов: клинический материал, образцы воды, материал из градирен и другие образцы.
• Клинические образцы: моча.
• Дополнительное применение: контроль проб воды.
• Назначение изделия: основа питательной среды.
• Тип питательной среды: селективная.
• Сертификат: ФСЗ 2009/03707.

Состав

Состав рассчитан и стандартизирован для обеспечения заданных рабочих параметров.

Принцип действия и интерпретация

Агар с углём и дрожжевым экстрактом был первоначально разработан Feeley и соавторами как модификация среды F-G Agar. В составе F-G Agar крахмал и ферментативный гидролизат казеина были заменены соответственно на активированный уголь и дрожжевой экстракт; такая модификация обеспечила лучшее выделение Legionella pneumophilla.

Последующее добавление буфера ACES улучшило рабочие характеристики среды. Дальнейшая модификация с добавлением α-кетоглутарата повысила чувствительность среды. Основа забуференного угольного агара с дрожжевым экстрактом соответствует модификации Edelstein.

Виды Legionella представляют собой не образующие спор узкие грамотрицательные палочки. Legionella вызывает пневмонию, известную как болезнь легионеров, а также лихорадочное заболевание, известное как Pontiac fever. В стандартных средах бактерии Legionella не окисляют и не ферментируют углеводы и не растут на кровяном агаре из овечьей крови. На забуференном угольном агаре с дрожжевым экстрактом рост происходит лучше и быстрее.

Основным источником энергии для Legionella служат аминокислоты. L-цистин является необходимым компонентом, поскольку играет важную роль в метаболизме роста Legionella. L-цистин и пирофосфат железа поддерживают рост Legionella. Компоненты среды выполняют следующие функции:

• активированный уголь действует как детоксикант;
• дрожжевой экстракт служит источником витаминов, азота и углерода;
• буфер ACES поддерживает оптимальный для роста pH;
• гидрохлорид L-цистина, пирофосфат железа и α-кетоглутарат стимулируют рост видов Legionella.

Для селективного выделения могут применяться антибиотические добавки, подавляющие сопутствующие микроорганизмы:

• селективная добавка C3V (FD037), содержащая цефалотин, колистин, ванкомицин и циклогексимид;
• селективная добавка MWY (FD040), содержащая глицин, полимиксин B, анизомицин, ванкомицин, бромтимоловый синий и бромкрезоловый пурпурный.

В отличие от F-G Agar, в забуференном угольном агаре с дрожжевым экстрактом используются активированный уголь, дрожжевой экстракт, буфер ACES и α-кетоглутарат для поддержки роста Legionella.

Методика приготовления среды

1. Приготовьте суспензию из 20,0 г основы в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Добавьте 2,4 г гранул KOH и перемешайте до растворения.
3. Нагрейте среду до кипения для полного растворения компонентов.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите среду до 45–50 °C.
6. В асептических условиях добавьте стерильное восстановленное содержимое по одному флакону селективной добавки MWY (FD040) и добавки для роста Legionella без SS, двойная упаковка (FD041A).
7. Тщательно перемешайте.
8. При постоянном перемешивании разлейте среду в стерильные чашки Петри. Следите за равномерным распределением частиц активированного угля.
9. Для дополнительного повышения селективности в расплавленную среду по выбору могут быть добавлены селективная добавка VCAT (FD017), селективная добавка C3V (FD037) или селективная добавка PGV (FD038).

Условия работы с культурами

При работе с культурами Legionella необходимо использовать халат, маску и перчатки. Работу следует проводить в защитном боксе.

Сбор и обращение с образцами

Клинические образцы

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с материалом согласно установленным руководствам.

Образцы воды

Сбор и обработку образцов воды выполняйте в соответствии с действующими руководствами и местными нормативами. После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Изделие предназначено для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открытием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики при работе с образцами и культурами.
• При обращении с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности согласно установленным руководствам.
• При необходимости обращайтесь к индивидуальным паспортам безопасности.

Ограничения применения

Для окончательного подтверждения результатов необходимо провести дополнительные биохимические тесты.

Рабочие характеристики и оценка

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный свободно текучий порошок серого или чёрного цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,7%-ным агаровым гелем.