Основа забуференного угольного агара с дрожжевым экстрактом HiMedia M813-100G (уп/100 гр)

Сухая основа питательной среды HiMedia M813-100G (уп/100 гр) для микробиологии с конечным pH 6,9±0,2. Используется после внесения селективных добавок для выделения и культивирования видов Legionella из клинических образцов и проб воды.

Назначение

Основа забуференного угольного агара с дрожжевым экстрактом предназначена для селективного выделения и культивирования видов Legionella из клинического и другого материала, включая образцы мочи и воды, в том числе пробы из градирен.

Тип питательной среды: селективная.
Назначение изделия: основа.
Сертификат: ФСЗ 2009/03707.
Физическая форма: порошок.
Происхождение: без компонентов животного происхождения, микробиологического происхождения.
Тип продукта: стандартный.
Тип упаковки: полиэтилен высокой плотности (HDPE).

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности среды.

Методика приготовления

1. Суспендируйте 20,0 г основы в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Добавьте 2,4 г гранул KOH и перемешайте до растворения.
3. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите среду до 45–50 °C.
6. В асептических условиях внесите стерильное восстановленное содержимое по одному флакону добавки MWY Selective Supplement (FD040) и добавки для роста Legionella без SS в двойной упаковке (FD041A).
7. Тщательно перемешайте и разлейте среду при постоянном перемешивании в стерильные чашки Петри. Необходимо обеспечить равномерное распределение частиц угля.
8. Для повышения селективности в расплавленную среду по выбору могут быть внесены селективные добавки VCAT (FD017), C3V (FD037) и PGV (FD038).

Принцип действия и интерпретация

Агар с углём и дрожжевым экстрактом первоначально был разработан Feeley и представлял собой модификацию среды F-G. В составе среды F-G содержались крахмал и ферментативный гидролизат казеина; впоследствии эти компоненты были заменены соответственно на активированный уголь и дрожжевой экстракт, что повысило выделение Legionella pneumophila.

Позднее было установлено, что добавление буфера ACES улучшает рабочие характеристики среды. Следующая модификация заключалась во внесении α-кетоглутарата, что способствовало повышению чувствительности. Основа забуференного угольного агара с дрожжевым экстрактом основана на этой модификации.

Legionella — неспорообразующие узкие грамотрицательные палочки. Бактерии рода Legionella вызывают пневмонию, включая болезнь легионеров, а также лихорадочное заболевание Pontiac fever. В обычных питательных средах представители рода Legionella не окисляют и не ферментируют углеводы и не растут на кровяном агаре с бараньей кровью. На забуференном угольном агаре с дрожжевым экстрактом рост происходит значительно лучше и быстрее.

Основным источником энергии для Legionella служат аминокислоты. L-цистин необходим для роста и играет важную роль в метаболизме Legionella. L-цистин и пирофосфат железа поддерживают рост бактерий. Активированный уголь действует как детоксицирующий компонент. Дрожжевой экстракт является источником витаминов, азота и углерода. Буфер ACES поддерживает оптимальный для роста pH. Гидрохлорид L-цистина, пирофосфат железа и α-кетоглутарат стимулируют рост видов Legionella.

Для селективного выделения могут использоваться антибиотические добавки, подавляющие сопутствующую микрофлору:

• селективная добавка C3V (FD037), содержащая цефалотин, колистин, ванкомицин и циклогексимид;
• селективная добавка MWY (FD040), содержащая глицин, полимиксин B, анизомицин, ванкомицин, бромтимоловый синий и бромкрезоловый пурпурный.

При работе с культурами Legionella необходимо использовать халат, маску и перчатки; работы следует проводить в защитном шкафу.

Типы образцов

• Клинические образцы: моча.
• Образцы воды.

Сбор и обработка образцов

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с материалом в соответствии с установленными руководствами.

Для образцов воды используйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно руководствам и местным нормативным требованиям.

После использования загрязнённые материалы перед утилизацией необходимо стерилизовать автоклавированием.

Технические характеристики

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от серого до чёрного цвета.

Желирование

Плотный гель, сопоставимый с гелем 1,7 % агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется опалесцирующий гель серо-чёрного цвета.

Реакция

Реакция водного раствора с концентрацией 4,0 % масс./об. при 25 °C: pH 6,9±0,2.

Диапазон pH

pH: 6,70–7,10.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют в атмосфере с влажностью 90 % с добавлением селективной добавки MWY (FD040) и добавки для роста Legionella без SS в двойной упаковке (FD041A), после инкубации при 35–37 °C в течение 3–4 суток.

* Соответствующие номера WDCM.

Ограничения применения

Для окончательного подтверждения результата необходимо провести дополнительные биохимические исследования.

Обращение и меры предосторожности

• Изделие предназначено для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открытием контейнера ознакомьтесь с маркировкой.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила микробиологической лабораторной практики при работе с образцами и культурами.
• При обращении с клиничес