Основа забуференного угольного агара с дрожжевым экстрактом HiMedia M813-100G (уп/100 гр)

Основа забуференного угольного агара с дрожжевым экстрактом HiMedia M813-100G (уп/100 г) для селективного выделения и культивирования видов Legionella. Применяется для анализа проб воды из градирен, клинического материала и других образцов; содержит активированный уголь в качестве детоксиканта.

Принцип измерения

Среда разработана на основе модификации Эдельштейна (Edelstein), которая базируется на угольном дрожжевом экстракте (CYE) с добавлением буфера ACES и альфа-кетоглутарата для повышения чувствительности. Виды Legionella представляют собой узкие грамотрицательные палочки, не образующие спор, которые не окисляют и не ферментируют углеводы в обычных средах и не растут на агаре с кровью овец.

Основные компоненты и их функции:

• Дрожжевой экстракт: богатый источник витаминов, азота и углерода.
• Активированный уголь: выполняет роль детоксиканта.
• Буфер ACES: поддерживает оптимальный pH для роста.
• L-цистин, пирофосфат железа (III) и α-кетоглутарат: стимулируют рост видов Legionella, так как аминокислоты являются основным источником энергии для этих микроорганизмов.

Для подавления сопутствующей микрофлоры используются антибиотические добавки, такие как C3V (цефалотин, колистин, ванкомицин и циклогексимид) или MWY (глицин, полимиксин B, анизомицин, ванкомицин, бромтимоловый синий и бромкрезоловый пурпурный).

Методика приготовления и анализа

Приготовление среды

1. Суспендируйте 20,0 г основы в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Добавьте 2,4 г гранул KOH, перемешайте до растворения.
3. Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов.
4. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.
5. Охладите до 45–50 °C.
6. В асептических условиях добавьте содержимое по одной ампуле каждой из добавок: селективной добавки MWY (FD040) и ростовой добавки Legi Growth Supplement (FD041A).
7. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри, обеспечивая равномерное распределение частиц угля.

Для повышения селективности в расплавленную среду по выбору могут быть добавлены:

• Селективная добавка VCAT (FD017);
• Селективная добавка C3V (FD037);
• Селективная добавка PGV (FD038).

Работа с образцами

• Клинические образцы: моча.
• Пробы воды: образцы из градирен и других систем. Сбор и обработка проб должны проводиться в соответствии с установленными руководствами и местными стандартами.

Технические характеристики

Состав (г/л)

Общие параметры

• Тип питательной среды: Элективный (основа)
• Сертификат: ФСЗ 2009/03707
• Происхождение: Без компонентов животного происхождения (микробный)
• Физическая форма: Порошок
• Цвет и вид: Серый или черный гомогенный свободнотекущий порошок
• Цвет готовой среды: Серо-черный опалесцирующий гель
• Реакция (4% водный раствор при 25 °C): pH 6,9 $\pm$ 0,2
• Диапазон pH: 6,70–7,10
• Желирование: Плотный гель, сопоставим с 1,7% агаром
• Материал упаковки: ПНД (HDPE)

Культуральные характеристики

Характеристики определены при инкубации в атмосфере с влажностью 90 % при температуре 35–37 °C в течение 3–4 суток с добавлением селективной добавки MWY (FD040) и ростовой добавки Legi Growth Supplement (FD041A).

* — соответствующие номера WDCM.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение основы: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C. Из-за гигроскопичности продукта необходимо плотно закрывать бутылку во избежание образования комков.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Требования к безопасности: работа с культурами Legionella должна проводиться в защитном кожухе (вытяжном шкафу) с использованием халатов, масок и перчаток.
• Утилизация: загрязненные материалы и остатки среды подлежат обязательному автоклавированию или инсинерации.

Ограничения применения

Результаты посева на данной среде требуют дальнейшего биохимического подтверждения для окончательной идентификации возбудителя.

Комплект поставки и совместимость

Основа поставляется в упаковке 100 г. Для полноценного использования среды требуются следующие добавки:

• FD040 Legionella Selective Supplement IV (MWY) / Селективная добавка для легионелл-IV
• FD041 Legionella Supplement / Добавка для легионелл (включая вариант FD041A Legi Growth Supplement w/o SS)