Основа агара для выделения легионелл HiMedia M809A-100G (уп/100 гр)

Микробиологическая питательная среда — основа агара для выделения легионелл HiMedia M809A-100G (уп/100 гр) производства HiMedia, с содержанием активированного угля 2,000 г/л и конечным pH 6,9 ± 0,2. Основа применяется для культивирования видов Legionella из проб воды после добавления ростовой или селективной добавки; готовую среду инкубируют при 35 °C.

Назначение

Основа агара HiMedia M809A-100G предназначена для приготовления питательной среды для культивирования видов Legionella из проб воды. Для применения необходимо добавление ростовой добавки Legionella Growth Supplement (BCYE); селективность обеспечивается дополнительным введением Legionella BMPA Selective Supplement или Legionella (GVPC) Selective Supplement.

• Тип питательной среды: элективный
• Назначение изделия: основа питательной среды
• Форма выпуска: порошок
• Масса упаковки: 100 г
• Сертификат: ФСЗ 2009/03709
• Методические требования: в соответствии с МУК 4.2.2217-07
• Происхождение компонентов: без компонентов животного происхождения, микробного происхождения

Состав

Состав на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных показателей эффективности.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 12,5 г порошка в 440 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте содержимое 1 флакона ростовой добавки Legionella Growth Supplement (BCYE), FD142.
6. Если селективную добавку Legionella (GVPC) Selective Supplement FD143 не добавляют, асептически внесите 10 мл стерильной дистиллированной воды, чтобы довести общий объём среды до 500 мл.
7. Конечный pH среды должен составлять 6,9 ± 0,2.
8. Тщательно перемешайте среду и разлейте в стерильные чашки Петри.
9. Во время разливания перемешивайте среду, чтобы предотвратить оседание частиц активированного угля.

Приготовление селективной среды

При необходимости селективную среду готовят асептическим добавлением восстановленного содержимого 1 флакона Legionella BMPA Selective Supplement FD144 или 1 флакона Legionella (GVPC) Selective Supplement FD143 вместе с 1 флаконом Legionella Growth Supplement (BCYE) FD142 к 440 мл стерильной расплавленной и охлаждённой основы Legionella Agar Base.

Среда без L-цистеина

Одновременно может быть приготовлена среда без L-цистеина. Для этого асептически добавляют содержимое 1 флакона Legionella Growth Supplement без L-цистеина FD206.

Принцип действия и интерпретация

Изначально агар Legionella назывался F-G agar. Feely и соавторы модифицировали среду, заменив крахмал активированным углём, а гидролизат казеина — дрожжевым экстрактом, что улучшило выделение Legionella pneumophila.

Добавление буфера ACES (N-2-ацетамидо-2-аминоэтансульфоновая кислота) повышает питательную ценность среды и помогает поддерживать pH, оптимальный для роста Legionella. Добавление α-кетоглутарата повышает чувствительность среды.

• Дрожжевой экстракт обеспечивает азотистые питательные вещества, необходимые для роста Legionella.
• Активированный уголь нейтрализует токсичные соединения, которые могут накапливаться в среде во время роста микроорганизмов или образовываться при стерилизации.
• Буфер ACES поддерживает требуемый pH среды.
• Антибиотики, входящие в состав добавок, подавляют рост различных контаминирующих бактерий и грибов.
• Виды Legionella имеют абсолютную потребность в L-цистеине.

Предположительно относящиеся к Legionella колонии можно пересевать одновременно на Legionella Agar Base с FD142 и на Legionella Agar Base с FD206. Все чашки инкубируют при 35 °C. Колонии, растущие на Legionella Agar Base с FD142, содержащей L-цистеин, но не растущие на Legionella Agar Base с FD206 без L-цистеина, могут рассматриваться как предположительно относящиеся к видам Legionella.

Тип образца

• Образец: вода

Отбор и обращение с образцами

Для проб воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов в соответствии с действующими руководствами и местными нормативными требованиями.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Меры предосторожности

• Перед открыванием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической практики при обращении с образцами и культурами.
• При работе с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности, установленные применимыми руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

Некоторые штаммы могут демонстрировать слабый рост из-за различий в их пищевых потребностях.

Оценка эффективности

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в соответствии с инструкцией на этикетке и в пределах срока годности при хранении при рекомендованной температуре.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный, легко сыпучий порошок серого или чёрного цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,3%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется непрозрачный гель чёрного цвета.
• Реакция: реакция 2,5%-ного водного раствора по массе на 25 °C после добавления Legionella Growth Supplement FD142; pH — 6,9 ± 0,2.
• Значение pH: 6,70–7,10.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 48–72 ч с добавлением стерильной Legionella Growth Supplement (BCYE) FD142 и Legionella (GVPC) Selective Supplement FD143 либо Legionella Growth Supplement без L-цистеина FD206.

* Соответствующие номера WDCM.

Хранение и срок годности

• Температура хранения неоткрытого продукта: 10–30 °C.
• Условия хранения: в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия храните продукт в сухом виде, плотно закрыв флакон, чтобы предотвратить образование комков вследствие гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Храните продукт в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После использования плотно закрывайте контейнер.
• Рабочие характеристики продукта сохраняются лучше всего при использовании в пределах установленного срока годности.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов путём автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов соблюдайте установленные лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с образцом, необходимо обеззаразить и утилизировать в соответствии с действующими лабораторными методиками.

Технические характеристики

Совместимые добавки

• FD142 — Legionella Growth Supplement (BCYE), ростовая добавка для легионелл
• FD160 — Legionella (GVPC) Selective Supplement, селективная добавка GVPC для легионелл
• FD144 — Legionella BMPA Selective Supplement, селективная добавка BMPA для легионелл
• FD143 — Legionella (GVPC) Selective Supplement, селективная добавка GVPC для легионелл
• FD206 — Legionella Growth Supplement без L-цистеина

Комплект поставки

• Основа агара для выделения легионелл HiMedia M809A-100G, 100 г

Отличие методики от неспецифического культивирования

Идентификацию предположительных видов Legionella проводят сравнением роста на среде с L-цистеином и на среде без L-цистеина: рост только на среде с FD142, содержащей L-цистеин, при отсутствии роста на среде с FD206 используют как дифференциальный признак.