Основа желточного агара HiMedia M808-500G (уп/500 гр)
Диагностическая питательная среда Основа желточного агара HiMedia M808-500G (уп/500 гр) в порошковой форме предназначена для приготовления агара с добавлением эмульсии яичного желтка. Основа желточного агара используется для выделения и идентификации клостридий и некоторых других анаэробов, при этом чашки нельзя считать отрицательными до инкубации в течение 7 суток из-за возможной задержки липазной активности.
Описание
Диагностическая питательная среда Основа желточного агара HiMedia M808-500G (уп/500 гр) в порошковой форме предназначена для приготовления агара с добавлением эмульсии яичного желтка. Основа желточного агара используется для выделения и идентификации клостридий и некоторых других анаэробов, при этом чашки нельзя считать отрицательными до инкубации в течение 7 суток из-за возможной задержки липазной активности.
Назначение
Основа желточного агара HiMedia M808-500G применяется для выделения и идентификации клостридий и некоторых других анаэробных микроорганизмов.
Основная область применения:
- клинические образцы: кал, материал из абсцессов и другие образцы;
- пищевые образцы;
- выявление и дифференциация микроорганизмов по лецитиназной, липазной и протеолитической активности.
Тип питательной среды: диагностическая.
Назначение изделия: основа.
Сертификат: ФСЗ 2009/03705.
Фасовка: 500 г.
Состав
Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.
| Компонент | г/л |
|---|---|
| Протеозопептон | 40,000 |
| Гидрофосфат динатрия | 5,000 |
| Дигидрофосфат калия | 1,000 |
| Хлорид натрия | 2,000 |
| Сульфат магния | 0,100 |
| Декстроза (глюкоза) | 2,000 |
| Гемин | 0,005 |
| Агар | 25,000 |
| Конечное значение pH при 25 °C | 7,6 ± 0,2 |
Принцип действия и интерпретация
Пищевое отравление, вызываемое Clostridium perfringens, относится к распространённым видам пищевых инфекций у человека. Обычно заболевание связано с готовыми мясными продуктами или продуктами из мяса птицы, содержащими большое количество жизнеспособных клеток. Основные симптомы диареи при отравлении, вызванном Clostridium perfringens, индуцируются термолабильным энтеротоксином, который продуцируется только спорулирующими клетками.
Основа желточного агара представляет собой модификацию основы агара Мак-Кланга—Тобе и используется для выделения и обнаружения Clostridium perfringens. По сравнению с исходной формулой в состав среды включён гемин.
Функции компонентов среды:
- протеозопептон обеспечивает микроорганизмы необходимыми питательными, углеродсодержащими и азотсодержащими веществами;
- фосфаты буферируют среду;
- хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие;
- сульфат магния служит источником двухвалентных катионов и сульфатов;
- глюкоза является источником энергии;
- гемин способствует усилению роста анаэробных микроорганизмов.
Микроорганизмы, продуцирующие лецитиназу, расщепляют лецитин, содержащийся в эмульсии яичного желтка. В результате вокруг колоний образуется нерастворимый непрозрачный осадок.
Липазопродуцирующие микроорганизмы расщепляют свободные жирные кислоты, содержащиеся в эмульсии яичного желтка. На поверхности колоний формируется радужный блеск. Липазная активность может проявляться с задержкой, поэтому чашки не следует считать отрицательными до инкубации в течение одной недели.
Протеолитическая активность проявляется образованием прозрачных зон вокруг колоний.
Среду следует инокулировать непосредственно исследуемым образцом.
Приготовление среды
- Взвесьте 75,10 г порошка в 900 мл очищенной или дистиллированной воды.
- Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
- Разлейте среду порциями по 90 мл в пробирки или колбы в зависимости от требуемого способа использования.
- Простерилизуйте среду в автоклаве при давлении 15 psi (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
- Охладите среду до 45–50 °C.
- Добавьте 10 мл стерильной эмульсии яичного желтка FD045 на каждые 90 мл среды.
- Тщательно перемешайте.
- Разлейте среду в стерильные чашки Петри.
Пробоподготовка и обращение с образцами
Перед инокуляцией чашки со средой необходимо восстановить, поместив их в анаэробный контейнер на 18–24 ч.
Для выявления небольшого количества анаэробных микроорганизмов одновременно следует инокулировать обогатительный бульон исследуемым образцом.
Для выделения микроорганизмов необходимо использовать стандартные процедуры.
Инкубацию проводят в течение 18–48 ч и продолжают до 7 суток.
После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.
Контроль качества
Внешний вид
Цвет: от кремового до жёлтого.
Состояние: однородный, легко сыпучий порошок.
Гелеобразование
Гель плотный, сопоставимый с 2,5%-ным агаровым гелем.
Цвет и прозрачность приготовленной среды
Базовая среда: гель среднего янтарного цвета, прозрачный или слегка опалесцирующий.
После добавления эмульсии яичного желтка FD045: в чашках Петри образуется жёлтый непрозрачный гель.
Реакция среды
Реакция 7,5%-ного водного раствора при 25 °C: pH 7,6 ± 0,2.
Диапазон pH: 7,40–7,80.
Культуральные характеристики
Культуральные характеристики определяют для среды с добавленной эмульсией яичного желтка FD045 после анаэробной инкубации при 35–37 °C в течение 48–72 ч. Чашки следует инкубировать до 7 суток, прежде чем считать результат отрицательным.
| Организм | Посевная доза (КОЕ) | Рост | Восстановление | Лецитиназная активность | Липазная активность* | Протеолитическая активность |
|---|---|---|---|---|---|---|
| Bacteroides fragilis ATCC 25285 | 50–100 | хороший–обильный | ≥50 % | отрицательная реакция | отрицательная, радужный блеск на поверхности колонии и среды отсутствует | отрицательная, прозрачная зона вокруг колоний отсутствует |
| Clostridium botulinum ATCC 25763 | 50–100 | хороший–обильный | ≥50 % | отрицательная реакция | отрицательная, радужный блеск на поверхности колонии и среды отсутствует | положительная, прозрачная зона вокруг колоний |
| Clostridium butyricum ATCC 13732 | 50–100 | хороший–обильный | ≥50 % | отрицательная реакция | отрицательная, радужный блеск на поверхности колонии и среды отсутствует | положительная, прозрачная зона вокруг колоний |
| Clostridium perfringens ATCC 12924 | 50–100 | хороший–обильный | ≥50 % | положительная, непрозрачная зона вокруг колонии | отрицательная, радужный блеск на поверхности колонии и среды отсутствует | отрицательная, прозрачная зона вокруг колоний отсутствует |
| Clostridium sporogenes ATCC 11437 | 50–100 | хороший–обильный | ≥50 % | отрицательная реакция | положительная, радужный блеск на поверхности колонии и среды | положительная, прозрачная зона вокруг колоний |
* Из-за возможной задержки липазной активности чашки не следует считать отрицательными до инкубации в течение 7 суток.
Ограничения применения
- Липазная активность может проявляться с задержкой; чашки не следует считать отрицательными до инкубации в течение одной недели.
- Разные микроорганизмы имеют различные требования к условиям роста и могут демонстрировать вариабельные характеристики роста на этой среде.
- Каждая серия среды проверена на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа.
- При использовании для конкретного микроорганизма, отсутствующего в сертификате анализа, рекомендуется валидировать среду с учётом специфических требований пользователя.
Ожидаемые рабочие характеристики
Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока годности и при хранении в рекомендованных условиях.
Условия хранения и срок годности
- Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C.
- Условия хранения: плотно закрытая ёмкость.
- Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
- Срок использования: до даты окончания срока годности, указан
Характеристики
Производитель/Серия
| Производитель | HiMedia |
|---|
Тип питательной среды
| Тип питательной среды | Диагностический |
|---|
Сертификат
| Сертификат | ФСЗ 2009/03705 |
|---|
Назначение изделия
| Назначение изделия | Основа |
|---|
