HiMedia M741-100G Основа агара для теста на ДНКазу без ДНК

Питательная среда HiMedia M741-100G Основа агара для теста на ДНКазу без ДНК — порошкообразная основа для приготовления среды с конечным pH 7,3 ± 0,2. Применяется для выявления активности ДНКазы у бактерий и грибов, при этом тестируемые микроорганизмы должны быть чистой культурой возрастом 18–24 ч.

Назначение и область применения

Основа агара используется после добавления ДНК для выявления дезоксирибонуклеазной активности бактерий и грибов, особенно для идентификации патогенных стафилококков.

При добавлении толуидинового синего среда применяется для дифференциации и идентификации непигментированных видов Serratia, выделенных из клинического материала, которые могут быть ошибочно идентифицированы как виды Enterobacter и Klebsiella.

Основа без ДНК также позволяет выявлять активность ДНКазы и ферментацию маннита после добавления маннита и индикаторного красителя бромтимолового синего.

Тип образца

Изолированные микроорганизмы из пищевых образцов.

Ограничения применения

• Тестируемые организмы должны находиться в чистой культуре и иметь возраст 18–24 ч.
• Для идентификации необходимо выполнить дополнительные подтверждающие тесты.

В отличие от готовой среды, M741-100G поставляется без ДНК и перед использованием требует добавления ДНК, бромтимолового синего и маннита.

Состав

Расчётный состав на 1 л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 40,0 г порошка в 1 000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Добавьте 2 г ДНК, 0,025 г бромтимолового синего и 10 г маннита.
3. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
4. Стерилизуйте в автоклаве при 118–121 °C в течение 15 мин и давлении приблизительно 0,083–0,103 МПа (12–15 фунтов давления).
5. Охладите среду до 45–50 °C.
6. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип измерения и интерпретация

Триптон и соевый пептон обеспечивают среду необходимыми питательными веществами.

Деполимеризацию ДНК, обусловленную активностью ДНКазы, выявляют одним из следующих способов:

• поверхность среды с добавленными ДНК и маннитом, но без бромтимолового синего, заливают 1 н. раствором соляной кислоты; активность ДНКазы проявляется в виде прозрачных зон вокруг колоний;
• при отсутствии активности ДНКазы в результате реакции соляной кислоты с нуклеиновыми кислотами образуется мутный осадок;
• при использовании бромтимолового синего вокруг колоний образуются жёлтые зоны.

Активность ДНКазы у микрококков была исследована Weckman и Catlin; была установлена корреляция между активностью ДНКазы и коагулазной активностью, поскольку коагулазоположительные виды также были ДНКазоположительными. Di Salvo подтвердил эти результаты и наблюдал точную корреляцию активности ДНКазы и коагулазы. В его эксперименте для активации фермента ДНКазы в среду добавляли ДНК и хлорид кальция.

Schreier модифицировал среду для выявления ДНКазы добавлением толуидинового синего. Модифицированная среда обеспечивала более быстрое выявление Serratia marcescens и позволяла отличать Serratia от других представителей семейства Enterobacteriaceae.

Для окончательной идентификации следует проводить дополнительные подтверждающие тесты.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления 2 г ДНК, 0,025 г бромтимолового синего и 10 г маннита и инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный, свободно текучий порошок кремового или жёлтого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

После добавления бромтимолового синего в чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель синего цвета.

Реакция

Реакция 5,2%-ного водного раствора при 25 °C:

• pH: 7,3 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 7,10–7,50.

Технические характеристики

• Назначение изделия: основа.
• Масса: 100 г.
• Конечный pH: 7,3 ± 0,2 при 25 °C.
• Условия хранения: 10–30 °C для сухого продукта в плотно закрытой ёмкости; 20–30 °C для приготовленной среды.

Сбор и обработка образцов

Для образцов изолированных микроорганизмов применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов согласно установленным лабораторным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Меры предосторожности

• Перед открыванием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической практики при обращении с образцами и культурами.
• При работе с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Правила безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.