Основа угольного кровяного агара HiMedia M646-500G (уп/500 гр)

Порошковая питательная среда «Основа угольного кровяного агара HiMedia M646-500G (уп/500 гр)» с конечным pH 7,5±0,2. Среда предназначена для культивирования Bordetella pertussis при производстве вакцин и сохранения лабораторных культур; перед использованием требует добавления стерильной дефибринированной крови лошади и селективных добавок.

Назначение

Основа угольного кровяного агара применяется для:

• культивирования Bordetella pertussis при производстве вакцин;
• первичного выделения Bordetella pertussis;
• сохранения маточных культур Bordetella pertussis на скошенной поверхности среды с еженедельными пересевами;
• выделения и культивирования Haemophilus influenzae при добавлении крови лошади;
• использования в качестве замены агара Борде — Жангу для выделения Bordetella pertussis и производства вакцин.

Тип образца: клинические образцы — мазки из носоглотки, мазки из зева, образцы при коклюше и другие; чистая культура для производства вакцин.

Состав

Для приготовления среды используют 54,5 г порошка на 900 мл очищенной или дистиллированной воды.

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия параметрам эффективности.

# Эквивалент экстракта говядины.

Принцип действия и интерпретация

Род Bordetella включает четыре вида: Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis, Bordetella bronchiseptica и Bordetella avium. Генетические исследования показали близкое родство этих микроорганизмов.

Единственными хозяевами B. pertussis и B. parapertussis являются люди. B. bronchiseptica встречается у широкого спектра животных и иногда выявляется у людей. B. avium обнаруживается у птиц.

Виды Bordetella являются облигатными аэробами и характеризуются низкой метаболической активностью. Все виды неподвижны, за исключением B. bronchiseptica. B. pertussis является основной причиной коклюша, а B. parapertussis связан с более лёгкой формой заболевания.

Для первичного выделения B. pertussis требуется добавление угля и 15–20 % крови, нейтрализующей ингибирующее действие компонентов среды на рост микроорганизма. Выделение B. pertussis требует использования среды обогащения.

Угольный агар готовят по методу Мишулова, Шарпа и Коэна. Угольная основа кровяного агара может применяться вместо агара Борде — Жангу для выделения B. pertussis и производства вакцин против B. pertussis.

При длительной инкубации на питательных средах выделение Bordetella pertussis из носоглоточного секрета затрудняется из-за подавления сопутствующей микрофлоры. Пенициллин добавляют в среду как противомикробный агент для ограничения роста загрязняющих микроорганизмов. Пенициллинорезистентная флора всё же может вызывать контаминацию. Для повышения селективности среды к пенициллину добавляют диамидино-дифениламин дигидрохлорид. Метициллин эффективнее пенициллина подавляет нежелательную носоглоточную флору, а цефалексин эффективнее метициллина.

Половинная концентрация угольной основы кровяного агара с цефалексином может использоваться как селективная среда обогащения и транспортная среда. Цефалексин подавляет загрязняющие грамположительные микроорганизмы, присутствующие в образце. Следует инокулировать как неселективную, так и селективную среду, поскольку некоторые штаммы B. pertussis могут незначительно подавляться цефалексином.

Пептон, пептон HM B и дрожжевой экстракт обеспечивают микроорганизмы необходимыми питательными веществами. Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс. Растворимый крахмал и уголь нейтрализуют токсичные для видов Bordetella вещества, включая жирные кислоты.

Уголь оседает на дне колбы. Перед разливом среды необходимо осторожно вращать колбы для получения однородной суспензии угля.

Методика приготовления среды

1. Приостановить 54,5 г порошка в 900 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревать до кипения при частом перемешивании до полного растворения среды.
3. Стерилизовать в автоклаве при давлении 15 фунтов на кв. дюйм, приблизительно 0,10 МПа, и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладить среду до 45–50 °C.
5. На каждые 100 мл среды добавить:
   • 10 мл стерильной дефибринированной крови лошади;
   • 0,3 мл стерильного раствора пенициллина концентрацией 100 ЕД/мл;
   • 0,3 мл 0,1%-ного раствора 4:4-диамидино-дифениламингидрохлорида.
6. Тщательно перемешать.
7. Разлить среду в стерильные чашки Петри.

Технические характеристики

Контроль качества

Внешний вид

Однородный, легко пересыпаемый порошок от серого до серовато-чёрного цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,2%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется чёрный непрозрачный гель с нерастворившимися чёрными частицами.

Реакция

Реакция 5,45%-ного водного раствора при 25 °C: pH 7,5±0,2.

Диапазон pH

pH: 7,30–7,70.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч на среде с добавлением стерильной дефибринированной крови лошади, раствора пенициллина концентрацией 100 ЕД/мл и 0,1%-ного раствора 4:4-диамидино-дифениламингидрохлорида.