Основа минеральной среды с глютаматом (двойная концентрация) модифицированная HiMedia M643-500G (уп/500 гр)

Питательная среда Основа минеральной среды с глютаматом (двойная концентрация) модифицированная HiMedia M643-500G (уп/500 гр) — порошковая основа двойной концентрации для выявления и подсчёта колиформных бактерий. Среда применяется при анализе проб воды и сточных вод, а предполагаемо положительные результаты требуют подтверждения в желчно-зелёном бульоне и биохимическими тестами.

Назначение и область применения

Основа минеральной среды с глютаматом используется для количественного определения колиформных бактерий в пробах воды и сточных вод, включая хлорированную и нехлорированную воду.

Среда также применяется для обогащения колиформных микроорганизмов, присутствующих в сыре и мясе. Расчёт наиболее вероятного числа (MPN) на 100 мл пробы воды выполняют по таблице MPN.

Состав

Содержание компонентов приведено для 1 л среды.

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия рабочим параметрам среды.

Приготовление среды

Двойная концентрация

1. Внесите 22,69 г части A и 12,7 г части B в 1000 мл дистиллированной воды, содержащей 5 г хлорида аммония.
2. При необходимости нагревайте до полного растворения среды.
3. Разлейте приготовленную среду по пробиркам, содержащим перевёрнутые трубки Дарема.
4. Стерилизуйте в автоклаве при 115 °C в течение 10 мин.

Одиночная концентрация

Для приготовления среды одиночной концентрации внесите 11,35 г части A и 6,35 г части B в 1000 мл дистиллированной воды, содержащей 2,5 г хлорида аммония.

Принцип действия и интерпретация результатов

Изначально для подсчёта колиформных бактерий в воде применяли бульон МакКонки. Позднее был описан химически определённый глутаматсодержащий состав, модифицированный добавлением лактозы. Добавление лактозы снижает количество ложноположительных результатов по сравнению с бульоном МакКонки. Для улучшения газообразования в состав добавляют хлорид аммония.

Среда содержит соли, аминокислоты и витамины, обеспечивающие основные питательные потребности колиформных бактерий. Лактоза служит сбраживаемым углеводом, а бромкрезоловый пурпурный — индикатором pH.

При ферментации лактозы образуется кислота, вызывающая изменение окраски среды на жёлтую. Газообразование определяют по пузырькам, захваченным в трубке Дарема. Пробирки с жёлтой окраской и газом считают предположительно положительными.

Методика рекомендована Американской ассоциацией общественного здравоохранения (APHA) для определения колиформных бактерий.

Методика анализа проб воды

Проба предположительно хорошего качества

1. Инокулируйте 50 мл пробы воды в 50 мл среды.
2. Дополнительно инокулируйте пять пробирок с 10 мл основы минеральной среды с глютаматом двойной концентрации M643, в каждую пробирку внося по 10 мл пробы воды.
3. Инкубируйте пробирки при 35–37 °C в течение 18–24 ч.
4. Пробирки с жёлтой окраской, обусловленной образованием кислоты, и пузырьками газа в трубках Дарема расценивайте как предположительно положительные.
5. Подтвердите положительные результаты посевом в желчно-зелёный бульон 2 % M121 и проведением биохимических тестов.

Сильно загрязнённая проба

1. В пять пробирок внесите по 5 мл среды одиночной концентрации.
2. В каждую пробирку добавьте по 1 мл десятикратного разведения пробы в соотношении 1:10.
3. Инкубируйте пробирки при 35–37 °C в течение 18–24 ч.
4. Пробирки с жёлтой окраской и газом расценивайте как предположительно положительные.
5. Подтвердите положительные результаты посевом в желчно-зелёный бульон 2 % M121 и биохимическими тестами.

Количество микроорганизмов выражают как наиболее вероятное число (MPN) на 100 мл пробы воды, используя таблицу MPN.

Контроль качества

Внешний вид компонентов

• Часть A: светло-жёлтый или зелёный однородный сыпучий порошок.
• Часть B: белый или кремовый однородный сыпучий порошок.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Приготовленная среда представляет собой прозрачный раствор фиолетового цвета без осадка.

Реакция среды

Реакция указана для смеси, содержащей 2,27 % масса/объём части A, 1,27 % масса/объём части B и 0,5 % масса/объём хлорида аммония, при 25 °C.

• pH: 6,7 ± 0,2.
• Контрольный диапазон pH: 6,50–6,90.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–48 ч.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia.
• Тип питательной среды: диагностический.
• Назначение изделия: основа.
• Концентрация: двойная.
• Фасовка: 500 г.
• Комплектация: двойная упаковка.
• Сертификат: ФСЗ 2009/03707.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухой среды: ниже 30 °C.
• Условия хранения: в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Срок использования: до даты истечения срока годности, указанной на этикетке.

Отличие методики

В составе среды лактоза используется как сбраживаемый углевод, бромкрезоловый пурпурный — как индикатор pH, а хлорид аммония добавляется для улучшения газообразования; положительные результаты подлежат подтверждению в желчно-зелёном бульоне 2 % и биохимическими тестами.