HiMedia M636S-100G Основа агара с феноловым красным, яичным желтком и полимиксином

Порошковая основа питательной среды HiMedia M636S-100G Основа агара с феноловым красным, яичным желтком и полимиксином для приготовления агара Маннитол–яичный желток–полимиксин (MYP) с конечным pH 7,2 ± 0,1. Основа предназначена для выделения и количественного определения Bacillus cereus в пищевых продуктах с дифференциацией колоний по ферментации маннита и лецитиназной активности.

Назначение и принцип действия

Основа агара MYP применяется для выделения и количественного определения Bacillus cereus, в том числе в пищевых продуктах. Среда является селективно-дифференциальной:

• пептический перевар животной ткани и мясной экстракт обеспечивают источник азота;
• ферментация маннита выявляется с помощью фенолового красного: колонии, ферментирующие маннит, окрашиваются в жёлтый цвет;
• эмульсия яичного желтка позволяет выявлять колонии, продуцирующие лецитиназу; такие колонии окружены зоной белого непрозрачного осадка;
• сульфат полимиксина B ограничивает рост грамотрицательных бактерий, включая Escherichia coli и Pseudomonas aeruginosa;
• Bacillus cereus дифференцируется от других видов рода Bacillus по неспособности ферментировать маннит и слабому спорообразованию.

Кислота, образуемая микроорганизмами, отличными от Bacillus cereus, может диффундировать через среду, что затрудняет различение ферментирующих и неферментирующих маннит микроорганизмов. Для подтверждения истинной реакции рекомендуется перенести подозрительные колонии на свежую среду.

Среда Маннитол–яичный желток–полимиксин (MYP) разработана Mossel и рекомендована APHA для количественного определения Bacillus cereus. Основа агара MYP рекомендована BIS для выделения и количественного определения Bacillus cereus.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных эксплуатационных параметров.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 46,03 г порошка в 900 мл дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 55 °C.
5. В асептических условиях добавьте стерильный раствор сульфата полимиксина B (FD003) до конечной концентрации 100 Ед/мл.
6. Добавьте 100 мл стерильной эмульсии яичного желтка (FD045) на 1000 мл среды.
7. Тщательно перемешайте.
8. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Методика интерпретации и подтверждения

Колонии, выросшие на агаре MYP, пересеивают на питательный агар и инкубируют при 30 °C в течение 24 ч. После инкубации наблюдают или определяют:

• вегетативные клетки;
• спорангий;
• морфологию спор;
• липидные глобулы внутри вегетативных клеток.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или светло-розовый однородный сыпучий порошок.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Базовая среда: прозрачный или слегка опалесцирующий гель красного цвета.
• После добавления эмульсии яичного желтка FD045: в чашках Петри образуется непрозрачный гель светло-оранжевого цвета.

Реакция

Реакция 4,6%-ного водного раствора по массе/объёму при 25 °C.

• pH: 7,2 ± 0,1.

Культуральные характеристики

Диапазон pH: 7,10–7,30.

Культуральные характеристики определяют после добавления эмульсии яичного желтка FD045 и сульфата полимиксина B FD003, после инкубации при 32 °C в течение 18–40 ч.

Технические характеристики

Область применения

Основа используется в микробиологических лабораториях для:

• выделения Bacillus cereus;
• количественного определения Bacillus cereus в пищевых продуктах;
• дифференциации Bacillus cereus и других видов рода Bacillus;
• оценки ферментации маннита;
• выявления лецитиназной активности по образованию непрозрачной зоны вокруг колонии;
• подтверждения морфологии вегетативных клеток, спорангиев, спор и липидных глобул после пересева на питательный агар.

Ключевое отличие среды MYP от неспецифических питательных сред — сочетание селективного подавления части грамотрицательной микрофлоры сульфатом полимиксина B и дифференциации колоний по ферментации маннита и лецитиназной активности.

Условия хранения и эксплуатации

Храните порошок в плотно закрытой ёмкости при температуре ниже 30 °C. Приготовленную среду храните при 2–8 °C. Используйте продукт до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.