HiMedia M613F-100G Модифицированный толуидиновый синий ДНК-агар

Модифицированный толуидиновый синий ДНК-агар HiMedia M613F-100G для определения термостабильной дезоксирибонуклеазы (ДНКазы). Применяется для видового определения S. aureus в загрязненных пищевых продуктах в соответствии с методикой FDA BAM (1998).

Принцип измерения и интерпретация

Среда предназначена для выявления термостабильной ДНКазы. ДНК в составе среды деполимеризуется под действием фермента, что приводит к образованию прозрачной зоны вокруг роста микроорганизмов. Толуидиновый синий благодаря своим метахроматическим свойствам делает эту реакцию видимой, создавая ярко-розовый ореол.

Трис(гидроксиметил)аминометан обеспечивает работу буферной системы, а хлорид натрия и хлорид кальция поддерживают осмотический баланс и предоставляют необходимые ионы. Данный тест является высокоспецифичным для подтверждения S. aureus, аналогично коагулазному тесту.

Методика проведения анализа

1. Подготовьте общий подсчет колоний подозреваемого образца с использованием агара Бэрда-Паркера (M043).
2. Подготовьте чашки Петри или микропрепараты, нанеся соответствующее количество среды (3 мл для микропрепарата).
3. После затвердевания среды создайте 10–12 лунок диаметром 1 мм.
4. Прогрейте бульонную культуру в кипящей водяной бане в течение 15 минут.
5. Внесите по 0,01 мл прогретой культуры в каждую лунку.
6. Инкубируйте в увлажненной камере при 35 °C в течение 4 часов.
7. Результат считается положительным при появлении ярко-розового ореола, выходящего минимум на 1 мм за периметр лунки.

Приготовление среды

1. Растворите 26,48 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов, продолжая кипятить в течение 1–2 минут.
3. Стерилизация не требуется.
4. Разлейте среду по стерильным чашкам Петри.

Технические характеристики

Состав, г/л:

Контроль качества

• Внешний вид: однородный свободно текущий порошок от светло-желтого до светло-серого цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,0 % агаром.
• Цвет и прозрачность готовой среды: синий прозрачный или слегка опалесцирующий гель в чашках Петри.
• pH: 8,80–9,20.

Культуральные характеристики

Для изучения термонуклеазной активности используют 18-часовую культуру в бульоне BHI, прогретую в кипящей водяной бане 15 минут. В агаре вырезают лунки 5 мм, заполняют 25–30 мкл культуры и инкубируют при 35–37 °C в течение 4 ч (или при 50 °C в течение 2 ч).

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: при температуре ниже 30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Срок годности: использовать до даты, указанной на этикетке.