HiMedia M613F-100G Модифицированный толуидиновый синий ДНК-агар

Питательная агаровая среда HiMedia M613F-100G Модифицированный толуидиновый синий ДНК-агар — химически определённая порошкообразная среда для приготовления культурального геля. Среда предназначена для выявления термостабильной дезоксирибонуклеазной активности и подтверждения видовой принадлежности Staphylococcus aureus в пищевых продуктах; стерилизация приготовленной среды не требуется.

Назначение

Модифицированный толуидиновый синий ДНК-агар применяется для выявления активности термостабильной ДНКазы и установления видовой принадлежности Staphylococcus aureus в контаминированных пищевых продуктах. Методика основана на образовании прозрачной зоны вокруг роста микроорганизмов и ярко-розового ореола вследствие метахроматических свойств толуидинового синего.

Среда рекомендована для определения термостабильной дезоксирибонуклеазной активности и видовой идентификации S. aureus в соответствии с FDA BAM, 1998, с изменением концентраций хлорида кальция и толуидинового синего.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 26,48 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Продолжайте кипячение в течение 1–2 мин.
4. Стерилизация не требуется.
5. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Staphylococcus — грамположительные бактерии, включающие несколько видов, способных вызывать широкий спектр инфекций у человека и животных вследствие инфицирования или образования токсинов.

Стафилококковая интоксикация относится к основным пищевым заболеваниям микробиологического происхождения; по частоте случаев она занимает второе место после сальмонеллёза. Пищевые продукты, приготовленные или хранящиеся без соблюдения гигиенических условий, могут способствовать размножению стафилококков и образованию токсинов. Поскольку заболевание вызывается токсином, стафилококковое пищевое отравление также называют пищевой интоксикацией.

ДНК в составе среды деполимеризуется под действием ДНКазы, что позволяет выявлять ферментативную активность по образованию прозрачной зоны вокруг микробного роста. Толуидиновый синий облегчает визуальное обнаружение активности ДНКазы: благодаря метахроматическим свойствам красителя возникает видимая ярко-розовая реакция.

Общий подсчёт микроорганизмов в подозрительной пробе проводят на агаре Байрд—Паркера (M043). Видовую принадлежность микроорганизма подтверждают на модифицированном толуидиновом синем ДНК-агаре. Подобно коагулазному тесту, метод является специфичным для подтверждения исследуемого микроорганизма.

Трис(гидроксиметил)аминометан образует буферную систему. Хлорид натрия и хлорид кальция обеспечивают наличие ионов и поддерживают осмотическое равновесие.

Методика выявления термостабильной ДНКазной активности

1. Приготовьте среду в чашках Петри или на микрослайдах, распределив соответствующий объём модифицированного толуидинового синего ДНК-агара: 3 мл для микрослайда.
2. После застывания среды подготовьте в чашках или на слайдах 10–12 лунок диаметром 1 мм.
3. Нагрейте бульонную культуру на кипящей водяной бане в течение 15 мин.
4. Внесите в лунки по 0,01 мл бульонной культуры.
5. Инкубируйте во влажной камере в течение 4 ч при 35 °C.
6. Положительная реакция определяется по появлению ярко-розового ореола, распространяющегося минимум на 1 мм от края лунки.

Контроль культуральных характеристик

Для исследования термонуклеазной активности используют 18-часовую культуру в бульоне для инфузии мозга и сердца (BHI). Культуру нагревают на кипящей водяной бане в течение 15 мин.

В агаровых чашках вырезают лунки диаметром 5 мм, заполняют каждую лунку 25–30 мкл подготовленной культуры и инкубируют при 35–37 °C в течение 4 ч. Допустимый альтернативный режим инкубации — 2 ч при 50 °C. После инкубации оценивают результат.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или светло-серый однородный сыпучий порошок.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,0%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель синего цвета.

Реакция среды

Реакция 2,65%-ного водного раствора при 25 °C.

• pH: 9,0 ± 0,2

Диапазон pH

• pH: 8,80–9,20

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Артикул: M613F-100G
• Назначение изделия: агар
• Форма выпуска: порошок
• Масса: 100 г
• Происхождение: химически определённая среда
• Тип продукта: стандартный
• Тип упаковки: HDPE
• Температурный диапазон, указанный в карточке: 10–30 °C

Условия хранения и срок годности

• Порошок хранить при температуре ниже 30 °C в плотно закрытой ёмкости.
• Приготовленную среду хранить при 2–8 °C.
• Использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.