HiMedia M583-500G Основа K.R.A.N.E.P. агара

Селективная питательная среда HiMedia M583-500G Основа K.R.A.N.E.P. агара для количественного определения общего числа стафилококков в пищевых продуктах. Применяется для выделения Staphylococcus aureus и коагулазоотрицательных стафилококков; вес упаковки 500 г.

Принцип измерения

K.R.A.N.E.P. агар (название образовано от начальных букв основных компонентов: Kalium-Rhodanid-Actidione-Natriumazid-Eigelb-Pyruvate) является селективной средой для подсчета Staphylococcus aureus в пищевых продуктах.

Селективность среды обеспечивается следующими компонентами:

• Тиоцианат калия и маннит: обеспечивают избирательный рост стафилококков.
• Азид натрия и циклогексимид: усиливают селективность, подавляя рост большинства дрожжей, плесеней и аэробных организмов, таких как виды Bacillus.
• Пируват натрия и эмульсия яичного желтка: выступают в роли стимулятора роста и диагностического агента соответственно.

Пептон, дрожжевой экстракт и пептон HM B обеспечивают необходимые питательные вещества, включая витамины группы B. Благодаря ингибиторам на данной среде не растут большинство грамотрицательных и многих грамположительных бактерий.

Методика проведения анализа

Подготовка среды

1. Суспендируйте 71,99 г основы в 900 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут.
4. Охладите до 45–50 °C.
5. Асептически добавьте 100 мл стерильной эмульсии яичного желтка (FD045).
6. Тщательно перемешайте и разлейте по стерильным чашкам Петри.

Посев и интерпретация

Посев осуществляется методом поверхностного посева (0,1 мл инокулята на чашку) или методом капельного посева (по 0,05 мл из разных ступеней десятикратных разведений).

После инкубации в течение 48 часов интерпретация результатов проводится следующим образом:

• S. aureus: хорошо развитые золотисто-желтые колонии с зоной осаждения яичного желтка (среда вокруг колонии остается опалесцирующей/непрозрачной).
• Для окончательной идентификации требуется проведение подтверждающих тестов на продукцию коагулазы.
• Колонии, типичные для S. aureus, но не имеющие реакции с яичным желтком, также должны быть проверены на коагулазу.

Технические характеристики

Состав, г/л:

Физико-химические свойства

• Внешний вид: однородный свободно текущий порошок от кремового до желтого цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,5% агаром.
• Цвет и прозрачность:
  • Базовая среда: светло-желтый прозрачный или слегка опалесцирующий гель.
  • После добавления эмульсии яичного желтка: желтый непрозрачный гель.
• pH (7,2% в/в водный раствор при 25 °C): 6,8 $\pm$ 0,2 (диапазон 6,60–7,00).
• Происхождение компонентов: животное.
• Форма выпуска: порошок.
• Тип упаковки: ПНД (HDPE).

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются при использовании стерильной эмульсии яичного желтка (FD045) после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 часов.

Область применения и ограничения

• Тип образцов: пищевые продукты.
• Назначение: селективный подсчет общего числа стафилококков, включая коагулазоположительные и коагулазоотрицательные штаммы (особенно актуально для мясных продуктов).
• Ограничения: для полной идентификации коагулазоположительных штаммов обязательно проведение подтверждающих тестов.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере. Из-за гигроскопичности продукта необходимо плотно закрывать бутылку во избежание образования комков. Хранить в сухом проветриваемом помещении, защищенном от экстремальных температур и источников возгорания.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Утилизация: загрязненные материалы должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации в соответствии с лабораторными протоколами работы с инфекционными материалами.