HiMedia M583-500G Основа K.R.A.N.E.P. агара

Питательная селективная среда HiMedia M583-500G Основа K.R.A.N.E.P. агара производства HiMedia в виде порошка массой 500 г предназначена для селективного количественного определения стафилококков в пищевых продуктах. Основа применяется для выявления общего количества стафилококков, включая коагулазоположительные и коагулазоотрицательные штаммы, при этом для полной идентификации необходимы подтверждающие тесты на коагулазу.

Назначение

Основа K.R.A.N.E.P. агара рекомендована для селективного количественного определения общего количества стафилококков в пищевых продуктах.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров рабочих характеристик.

Пептон HM B эквивалентен мясному экстракту.

Методика приготовления среды

1. Приготовьте суспензию из 71,99 г порошка в 900 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 100 мл стерильной эмульсии яичного желтка FD045.
6. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация результатов

K.R.A.N.E.P. Agar — селективная среда для количественного определения Staphylococcus aureus в пищевых продуктах. Среда впервые была описана Sinell и Baumgart.

Название K.R.A.N.E.P. образовано начальными буквами основных диагностических, селективных и стимулирующих компонентов: Kalium-Rhodanid-Actidione-Natriumazid-Eigelb-Pyruvate, то есть тиоцианат калия, циклогексимид, азид натрия, эмульсия яичного желтка и пируват.

Селективность среды для выявления стафилококков обеспечивается присутствием тиоцианата калия и маннитола. Дополнительное усиление селективности достигается за счёт азида натрия и циклогексимида. Пируват натрия действует как стимулятор роста, а эмульсия яичного желтка — как диагностический компонент.

Среда рекомендована для селективного выделения коагулазоотрицательных стафилококков из мясных продуктов. Поэтому среду применяют для определения общего количества стафилококков в пищевых продуктах, включая коагулазоположительные и коагулазоотрицательные стафилококки.

Пептон, дрожжевой экстракт и пептон HM B обеспечивают среду основными питательными веществами, включая витамины группы B. Циклогексимид подавляет большинство дрожжей и плесневых грибов. Азид натрия подавляет сопутствующие аэробные микроорганизмы, включая бактерии рода Bacillus, которые могут мешать культивированию стафилококков. Из-за присутствия ингибирующих компонентов на среде не растут различные грамотрицательные и грамположительные бактерии.

Через 48 ч инкубации хорошо выросшие золотисто-жёлтые колонии с зоной преципитации компонентов яичного желтка в среде, которая остаётся непрозрачной, рассматривают как S. aureus. Для подтверждения необходимы тесты на образование коагулазы. Колонии, типичные для S. aureus, но не демонстрирующие реакции с яичным желтком, также проверяют на коагулазу; при положительной реакции их видовую принадлежность подтверждают дополнительными тестами.

Посев и проведение анализа

Посев выполняют методом поверхностного распределения или методом капельного посева:

• при поверхностном распределении используют 0,1 мл инокулята на чашку Петри;
• при капельном посеве наносят по 0,05 мл из каждой последовательной десятикратной серии разведений.

Культуральные характеристики учитывают после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч на среде с добавленной стерильной эмульсией яичного желтка FD045.

Тип образцов

Пищевые продукты.

Отбор и обращение с образцами

Для пищевых образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения

Для полной идентификации коагулазоположительных штаммов требуются подтверждающие тесты на коагулазу.

Контроль качества

Внешний вид

Кремовый или жёлтый однородный сыпучий порошок.

Желирование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Базовая среда: светло-жёлтый прозрачный или слегка опалесцирующий гель.
• После добавления эмульсии яичного желтка: в чашках Петри образуется жёлтый непрозрачный гель.

Реакция среды

Реакция 7,2%-ного водного раствора при 25 °C: pH 6,8 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 6,60–7,00.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют на среде с добавленной стерильной эмульсией яичного желтка FD045 после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Назначение изделия: основа питательной среды
• Физическая форма: порошок
• Масса: 500 г
• Происхождение: животное
• Тип продукта: стандартный
• Тип упаковки: полиэтилен высокой плотности (HDPE)
• Конечный pH среды: 6,8 ± 0,2 при 25 °C
• Диапазон pH: 6,60–7,00
• Температура хранения невскрытого продукта: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C

Хранение и срок годности

Храните продукт при температуре 10–30 °C в плотно закрытой ёмкости. Приготовленную среду храните при 2–8 °C. Используйте продукт до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

После вскрытия продукт необходимо хранить в сухом виде, плотно закрывая флакон, чтобы предотвратить образование комков вследствие гигроскопичности порошка. Неправильное хранение может привести к комкованию продукта.

Храните продукт в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения. После использования плотно закрывайте ёмкость. Рабочие характеристики продукта сохраняются при использовании в течение указанного срока годности.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов путём автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов соблюдайте установленные лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с образцами, необходимо обеззараживать и утилизировать в соответствии с действующими лабораторными методиками.