Диагностическая основа агара для C. perfringens (O.P.S.P.) HiMedia M579-500G (уп/500 г) предназначена для селективного выделения и подсчета Clostridium perfringens в пищевых продуктах. Среда используется в сочетании с селективными добавками; сертификат ФСЗ 2009/03709.
Принцип измерения
Среда основана на формуле Handford и предназначена для изоляции C. perfringens в пищевых образцах. Триптон, экстракт дрожжей, соевый пептон и экстракт печени (HL extract) обеспечивают необходимые азотистые питательные вещества, витамины группы B и микроэлементы. Метабисульфит натрия и цитрат аммония-железа (III) служат индикаторами восстановления сульфита бактериями C. perfringens, что приводит к образованию характерных чёрных колоний. Трис-буфер поддерживает стабильность pH. Высокая селективность достигается за счёт добавления антибиотиков (сульфадиазин, олеандомицин и полимиксин B), которые подавляют рост других сульфитредуцирующих бактерий, включая Salmonella, Bacillus spp., Proteus spp. и стафилококков.
Методика проведения анализа
Подготовка пробы
- Приготовьте 10-кратное разведение 10 % гомогената пищевого образца в 0,1 % пептонной воде (M028).
- Для определения жизнеспособного количества бацилл или спор C. perfringens высейте 0,1 мл различных разведений на дублирующие чашки кровяного агара с содержанием гентамицина 5 мг/л.
- Инкубируйте при 37 °C в течение 18–24 ч в двух наборах: один в анаэробных условиях, другой в аэробных.
- Альтернативный метод: внесите 1 мл разведения в 25 мл расплавленного и охлаждённого агара Perfringens (O.P.S.P.) с добавками. Инкубируйте в анаэробных условиях при 37 °C в течение 18–24 ч.
Приготовление среды
- Суспендируйте 25,25 г основы в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
- Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов.
- Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление ≈0,1 МПа) в течение 15 минут.
- Охладите до 45–50 °C.
- В асептических условиях добавьте по одной восстановленной виале добавок Perfringens Supplement-I (FD011) и Perfringens Supplement-II (FD012).
- Тщательно перемешайте перед разливом в стерильные чашки Петри.
Технические характеристики
Состав (г/л)
| Компонент | г/л |
|---|
| Триптон | 15,000 |
| Соевый пептон | 5,000 |
| Экстракт дрожжей | 5,000 |
| Экстракт печени (HL extract) | 7,000 |
| Цитрат аммония-железа (III) | 1,000 |
| Метабисульфит натрия | 1,000 |
| Трис-буфер | 1,500 |
| Агар | 15,000 |
- Конечный pH (при 25 °C): 7,3 ± 0,2
- Внешний вид: порошок от кремового до коричневато-жёлтого цвета, однородный, свободно текущий
- Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,5 % агаром
- Цвет и прозрачность готовой среды: янтарный прозрачный или слегка опалесцирующий гель
- Диапазон pH: 7,10–7,50
Дополнительные параметры
| Параметр | Значение |
|---|
| Происхождение | Животное |
| Тип продукта | Регулярный |
| Физическая форма | Порошок |
| Тип упаковки | ПНД (HDPE) |
Культуральные характеристики
Результаты наблюдаются после инкубации при 35–37 °C в течение 18–48 ч с добавлением Perfringens Supplement I (FD011) и Perfringens Supplement II (FD012).
| Организм | Посевная доза (КОЕ) | Рост | Восстановление | Цвет колонии |
|---|
| Bacillus subtilis subsp. spizizenii ATCC 6633 | ≥104 | подавлен | 0 % | |
| Clostridium bifermentans ATCC 17837 | ≥104 | подавлен | 0 % | |
| Clostridium butyricum ATCC 13732 | ≥104 | подавлен | 0 % | |
| Clostridium perfringens ATCC 12924 | 50–100 | обильный | ≥50 % | чёрный |
| Enterococcus faecalis ATCC 29212 | 50–100 | отсутствует/слабый | ≤10 % | белый, если есть |
| Proteus vulgaris ATCC 13315 | ≥104 | подавлен | 0 % | |
| Salmonella Typhi ATCC 6539 | ≥104 | подавлен | 0 % | |
| Staphylococcus aureus subsp. aureus ATCC 25923 | ≥104 | подавлен | 0 % | |
Область применения и ограничения
Применяется для анализа пищевых продуктов (мясо, мясные пироги, птица, рагу, подливы).
Ограничение: для окончательной идентификации штаммов необходимо проведение дополнительных биохимических и серологических тестов.
Условия эксплуатации и хранения
- Хранение порошка: при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
- Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
- Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание образования комков.
- Утилизация: отработанные среды и образцы подлежат автоклавированию или сжиганию в соответствии с правилами работы с инфекционными материалами.
Комплект поставки и совместимость
Основа агара поставляется в упаковке 500 г. Для обеспечения селективности среды необходимо использовать следующие добавки:
- FD011 Perfringens Supplement-I / Добавка с сульфадиазином
- FD012 Perfringens Supplement-II / Добавка с канамицином и полимиксином
